LABORATOIRE DE CRYPTOGAMIE MUSEUM NATIONAL D'HISTOIRE NATURELLE 12, RUE BUFFON, 75005 PARIS PUBLICATION TRIMESTRIELLE Décembre 1987 SOMMAIRE Don R. REYNOLDS — A nonbitunicate ascus in the ascostromatic genus CELLET RTL оАо а L.M. MELENDEZ-I HOWELL, A. BELLEMERE ‘ET Je -L. ROSSIGNOL — Remarques à propos de l'ultrastructure d'ascospores « albinos » ou « gra- nuleuses » de mutants d'Ascobolus immersus Pers. (géne b8) ........ L. NAJIM — Contróle morphogénétique de la différenciation des sclérotes de Sclerotinia fructigena : 11 — Études cytologiques et ultrastructurales A.II. ABDEL-HAFEZ, A.M.M. MOHARRAM and A.Y. ABDEL-MALLEK — Thermophilic and thermotolerant fungi associated with seeds of five members of Umbelliferae from Egypt ........................... G. MORENO, C. ILLANA and M. HEYKOOP — Cano e iberica pi nov. in Spain (Bolbitiaceae, Agaricales) . Analyses bibliographiques ........ Table du Tome 8 — 1987 CONTENTS Don R. REYNOLDS — A nonbitunicate ascus in the ascostromatic genus И L. M. MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL — Remarks concerning the ultrastructure of ascospore mutants « albino » and c granular » in Ascobolus immersus Pers. (bs gene). (in French) .. L. NAJIM — Morphogenetic control of sclerotia differentiation of Sclero- tinia fructigena : I1 — Cytological and ultrastructural studies. (in French) A.LI. ABDEL-HAFEZ, A.M.M. MOHARRAM and A.Y. ABDEL-MALLEK — Thermophilic and thermotolerant fungi associated with seeds of five members of Umbelliferae from Egypt ....................... G. MORENO, C. ILLANA and M. HEYKOOP — Gastrocybe iberica sp. nov. in Spain (Bolbitiaceae, Agaricales) . и. PES Table of Volume 8 — 1987 315 321 329 335 251 269 289 315 321 329 335 Source : MNHN. Paris CRYPTOGAMIE MYCOLOGIE TOMES Fascicule 4 1987 Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM DIRECTEUR SCIENTIFIQUE : Madame J. NICOT SECRÉTAIRE DE RÉDACTION : Mme M.C. BOISSELIER. ÉDITEUR : A.D.A.C. Publié avec le concours du Muséum National d'Histoire Naturelle CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE est indexé par : Biological Abstracts, Current Contents, Publications bibliographiques du CDST (Pascal) Copyright © 1987. Cryptogamie Mycologie NAA (Gist | Bibliothèque Centrale Muséum за 3 3001 002277 Bource : MNHN. Paris Source : MNHN. Paris Cryptogamie, Mycol. 1987, 8 (4) : 251-268 251 A NONBITUNICATE ASCUS IN THE ASCOSTROMATIC GENUS ASTERINA by Don R. REYNOLDS* ABSTRACT — The ascus of Asterina carbonacea Cooke is nonbitunicate and is formed in an ascostroma. There is a similarity with the eu-archaeascé ascus type. A comparison of this ascus type with the bituni- cate ascus demonstrates a difference in the wall structure and the origin of the extended wall formed during spore ejaculation, The primary ascus wall stains blue with IKI and Sudan Black B ; pretreatment with KOH before IKI results in a nonstaining primary wall and blue-staining of the secondary wall. The banded pattern of the secondary wall is recognizable as Couche D1 and Couche D2. Couche D2 extends in ascospore dispersal from an apically positioned dome-shaped wall component into a tube reaching to the surface of the ascocarp. None of the ascus wall layers separate during spore dispersal. This study indicates that the family Asterinaceae should be recognized as a taxon apart from those included in the loculoascomycetes RÉSUMÉ — L'asque d'Asterina carbonacea Cooke est non-bituniqué et est formé dans un ascostroma Il présente une similitude avec le type eu-archaeascé. La comparaison avec l'asque bituniqué montre une différence dans la structure de la paroi et dans l'origine de celle qui se forme, par extension, pour l'éjection des spores. La paroi primaire de l'asque se colore en bleu avec l'IKI et le noir Soudan B ; un prétraitement par KOH avant l'IKI ne donne pas de coloration de la paroi primaire, mais une coloration bleue de la paroi secondaire. On peut reconnaitre les couches D1 et D2 dans la paroi secondaire. Lors de la dispersion des ascopores, la couche D2 s'allonge, à partit d'une zone apicale en forme de dôme, en un tube qui rejoint la surface de l'ascocarpe. Aucune des couches de la paroi ascale ne se sépare pen dant les processus d'éjection des spores. Cette étude indique que la famille des Asterinaceae doit être reconnue comme un taxon particulier parmi les loculo-ascomycètes. KEY WORDS : Asterina, ascostromatic ascomycete, ascus. * Natural History Museum, 900 Exposition Boulevard, Los Angeles, California 90007 USA Source : MNHN. Paris 252 Don R. REYNOLDS INTRODUCTION The ascus has a wide variance in structure (SHERWOOD, 1981 ; ERIKSSON, 1981). HAWKSWORTH & al. (1983) noted that the recognition of only the bituni- cate, prototunicate, and unitunicate major ascus types in the last decade is too simplistic an approach to ascus characterization. The development of an Asterina species was shown by WARD (1882) to be ascos- tromatic in that the ascocarp developed before the origination of asci from an inclu- ded hyphal system that formed a « boss or raised disc ». The asci were illustrated as uniformly thin-walled. The ascus of Asterina melastomatis Léveillé was illustrated by ARNAUD (1918) as having a thickened apical region with the tube-shaped extension of the proto- plast ; ascospores were shown reaching the outer surface of the ascocarp hyme- nium in linear form from an extended thin-walled cupulate enclosure that appears to be intended as the expended ascus. The asci of Asterina mulleri Stevenson (STE- VENSON, 1943) and A. solanacearum Orejuela (OREJUELA, 1944) were descri- bed as « evanescent ». The family of the species studied here, the Asterinaceae Hansford, has been described as having a « probably semifissitunicate » or « rostrum-like » jack-in-the- box ascus (ERIKSSON, 1981). ERIKSSON (1981) described the rostrate type of ascus as having a wall that is « reverted and extruded as a rostrum ». The semifissituni- cate type of ascus was described as having a « reverted » inner wall which exten- ded as a « rather long rostrum ». The Asterinaceae ascus characterization was composed by ERIKSSON (1981) from a description of the ascus of the assumed type species of the family type genus; «type species not indicated, but commonly cited as A. melastomatis Léveillé ». The material studied was not the type material from Brasil (LEVEILLE, 1845), but rather Guatemalan material collected in 1907 and distributed as # 1749 in Rehm's ascomycete exsiccatum. The inner wall was said to be distinct and stai- ning IKI+ blue and Congo Red+ as minute granules on the ascus surface. The inner wall was described as a layered, up to approximately 6 um thick, « apical dome » which showed an « ocular chamber » and a Cobolt Blue+ meniscus. The ascus of the asterinaceous Placoasterella baileyi (Berkeley & Broome) Arx was examined with electron microscopic resolution by TYSON & GRIFFITHS (1976b). They found the banded pattern secondary wall and compared the struc- ture to that found by REYNOLDS (1971). The ascus was observed to undergo an elongation of the secondary wall prior to losing a basal attachment in the asco- carp. The entire ascus and the contained ascospores of this species were found to be discharged from the ascocarp with separation of the wall into two layers ; no actual ascospore discharge was seen by these authors, but a « mechanism invol- ving the dissolution of the thin ascospore-enclosing sheath, and the passive release of ascospores » was suggested. ERIKSSON (1981) pronounced the dehiscence of the ascus of P. baileyi as « pseudofissitunicate » after the false Jack-in-the-Box ascus of PARGUEY-LEDUC & CHADEFAUD (1963) ; the ascospores are extruded in the uppermost part of the epiplast with the surrounding plasmalemma in this mode of dehiscence. Source : MNHN, Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 253 MATERIALS AND METHODS The ascus used in this study is that of Asterina carbonacea Cooke. The material used in this study is curated in Herbarium LAM as # 300451. The collection was made by Allen G. SHUEY from a cypress swamp located 1 mile west of US Highway 441/17-92 and 4.5 miles north of the Orange-Osceola county line, between Kissimmee and Orlando, Florida, Section 16, Township 24S, Range 29E, on 5 February 1980. The fungus was growing on the surface of the leaves of the swamp red bay, Persea palustris (Raf.) Sarg. Light microscope observations were made with a Zeiss dissection microscope and a Nikon compound microscope. Whole and squash mounts and handcut cross sections were made of the ascocarps. The hymenial layer was dissected from KOH pretreated ascocarps. Final mounts for observations were made in lactophenol. Cytochemical tests were made according to the protocol of ERIKSSON (1981) and BARAL (1987). Transmission electron microscope observations were made with a JOEL 100 CXII electron microscope at 80 KV. Fruit bodies were teased off the surface of a leaf into a 3% KOH solution and allowed to soak for approximately ten minutes. The material was then fixed in 2% glutaraldehyde and 2% paraformaldehyde mixed with a 0.1 M cacodylate buffer containing 0.02% CaCl2. The material was rinsed with the buffer after 24 hours in the fixative, and then rinsed with 30% ethanol. The ascocarps were soaked in 50% ETOH containing 0.5% uranyl acetate for 12 hours. Dehydration was carried out in a series of 80%, 95%, and 100% ETOH and in 100% propylene oxide. The infiltration of the embedding material began in a 12-hour soak in a 50/50 ratio of propylene oxide and Spurr's medium. Final embedding was carried out in the medium-hard formula of the Spurr's epoxy. A Sorvall MT2-B ultramicrotome equipped with a diamond knife was used to pro- duce approximate 0.75 mm thick sections for review with the light microscope and approximate 800 angstrom sections for TEM viewing. Staining of the thin sec- tions was done with an aqueous saturated solution of uranyl acetate, followed by the lead citrate stain. Scanning electron microscope observations were made with a Cambridge S4-10. Dried leaf specimens with fruit bodies were coated with gold-platinum in a sputterer coater. RESULTS The life cycle (Fig. 1) begins with the germination of the two-celled ascospore (Figs. 1 A-B) on the leaf surface. An initial hypha is formed in usually the apical area of one ascospore cell (Fig. 1 BJ ; branching is apparent after the formation of only a few cells (Fig. 1 CJ. The hyphopodia begin to appear soon thereafter (Fig. 1D). The ascocarp is comprised of a pair of hyphal systems which make up what is essentially a fruitbody with indeterminate growth. The ascocarp originates, appa- rently at random, from a hyphal cell of the darkly pigmented foliicolous myce- lium (Figs. 1 E, 2 A). Resultant growth progresses in a plane parallel to the substrate surface. Divisions of the first and a few subsequent cells initiate prescribed meris- tematic activity. The first cells are somewhat irregularly arranged as a flattened mass (Fig. 1 F). A peripheral meristematic zone is established by cell division in Source : MNHN, Paris 254 Don R. REYNOLDS cohesive hyphal tips (Figs. 1 G-I). The lead cell of each component hyphal strand gives rise to one to several cells which diverge regularly into the upper hyphal system and irregularly into a lower hyphal system. F Fig. 1 — Asterina carbonacea Cooke. Life history. A. Three bicelled ascospores. B. Ascospore with germ tube. C. Initial hypha of young mycelium with three branches. D. A more advanced mycelium with hyphopodia on some component hypha. E. Hypohyphal growth preliminary to ascocarp formation. F. Young ascocarp initial. G-H. More advanced ascocarp stages with radiate pattern of upper hyphal system layer evident. I. Mature ascocarp with ruptured upper layer and continued growth of indivi- dual hyphal strands at the ascocarp edge. Fig, 1 — Cycle d'Asterina carbonacea Cooke. A. Trois ascospores bicellulaires. B. Ascospore avec tube germinatif. C. Hyphes initiales de mycélium jeune avec 3 ramifications. D. Mycélium plus âgé avec des hyphopodes sur quelques hyphes. E. Croissance hypohyphale précédant la formation de l'asco- carpe. F. Début d'un ascocarpe. G-H. Stades d'ascocarpes plus avancés montrant l'orientation rayon- nante de la couche hyphale supérieure. I. Ascocarpe mür montrant une rupture de la couche supérieure et la croissance continue des hyphes individuelles sur les bords. Fig. 2 — Asterina carbonacea Cooke. Views of the ascocarp (S.E.M.). A. Four ascocarps (arrows) in the initial stages of formation from beneath the hyphal strand of origin. B. Ascocarps (arrows) at a more advanced stage with the radial pattern of upper hyphal system layer evident. C. Mature ascocarp with intact upper hyphal system layer. Note the hyphopodiate hyphae traversing the leaf surface and the ascocarp surface as well Fig. 2 — Ascocarpe d’ Asterina carbonacea Cooke (M.E.B.). A. Premiers stades de formation de 4 ascocarpes (flèches) sous les hyphes initiales. B. Ascocarpes (flèches) à un stade plus avancé montrant l'orienta- tion rayonnante de la couche hyphale supérieure. C. Ascocarpe mûr montrant une couche hyphale supérieure intacte. Noter l'hyphe hyphopodiale traversant la surface de la feuille et celle de l'ascocarpe. Source : MNHN, Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA Source : MNHN, Paris 256 Don R. REYNOLDS An unmagnified dorsal view of the upper hyphal system shows a small, roun- ded, black growth on the surface of a leaf. Low magnification demonstrates the radial pattern of the component darkly pigmented hyphae which branch at more- or-less regular intervals so that a tissue-like confluence is maintained with increa- sing diameter of the fruitbody (Figs. 1 H-I, 2 B-C). The synchronized division results in a concentric pattern of surface ridges (Fig. 2). The upper layer maintains its integrity until the pressure from the contained maturing asci, beginning their dis- charge, causes it to break into deciduous segments in larger-sized fruit bodies (Fig, 1 1). Separations between hyphal strands occur at several points in the central older portion of the ascoma and radiate outward toward the ascocarp edge. The resul- tant stellate pattern of the split, pigmented, upper hyphal system is visually enhan- ced because of the exposed underlying non-pigmented lower hyphal system. The angular flaps of pigmented hyphae initially remain intact as additional peripheral meristematic activity and a corresponding maturing of the central area hymenium occur. Further disintegration of the stellately fractured upper layer into small bits of tissue is usually associated with the older ascocarp. Both mature asci and deve- loping asci become apically exposed with only a few hyphal strands running over the surface of the ascocarp (Fig. 3 A-B). At this stage vertically oriented portions of the upper layer remain near the outer ascocarp edge (Fig. 3 C) Source : MNHN, Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 257 The lower hyphal system is the source of the asci and of secreted gelatineous material. This system is first apparent when the upper hyphal system reaches a diameter in the range of 300 um (Fig. 4). Copious production of a hygroscopic mucin coincides with the formation of primary branches directly from the peripheral meristem zone at irregular intervals. Toluidine blue staining of thin sections and of squash mounts results in a metachromatic reaction of the gel ; it becomes an intense purple to light lavender. The non-pigmented hyphae of the lower hyphal system ultimately form a loose mycelial network under the overlying upper hyphal system. Secondary branches develop from outgrowths of the primary hyphal cell at close intervals. Fig. 4 — Asterina carbonacea Cooke. Longitudinal section through the ascocarp (T.E.M.). The upper hyphal system forms the shield shaped ascocarp wall jaw). The ascus initials (ac) originate from the lower hyphal system. A layer of gelatinous material pervades the entire ascocarp. Fig. 4 — Coupe longitudinale de l'ascocarpe d'Asterina carbonacea Cooke |M.E.T.]. Le systeme hyphal supérieur forme la paroi de l'ascocarpe en forme de bouclier [aw]. Les initiales des asques [ac] se forment partir du systéme hyphal inférieur. Une couche de matériel gélatineux occupe l'ascocarpe tout entier. Fig. 3 — Schémas de l'ascocarpe d'Asterina carbonacea Cooke. Vue apicale montrant que le réseau hyphal supérieur du bouclier est désagrégé à l'exception de quelques cellules restant à la surface d'une matrice gélatineuse. On voit des asques immatures et des asques contenant les ascospores B. Coupe longitudinale au milieu d'un ascocarpe már à la surface d'une feuille. Le réseau hyphal supérieur formant le bouclier et le réseau hyphal inférieur ascogene sont immergés dans une matrice gelatineuse. C. Coupe longitudinale sur les bords d'un ascocarpe mür. Le système hyphal supérieur est orienté verticalement sur les bords de la masse hyméniale. Fig. 3 — Asterina carbonacea Cooke. Diagramatic views of the ascocarp. A. Aerial view of the upper hyphal system forming the shield has disintegrated except for a few cells remaining on the surface of the inapparent gelatineous matrix. Both immature asci and asci with ascospores are illustrated. B. Longitudinal midsection through mature ascocarp on leaf surface. The upper hyphal system for- ming the shield and the lower hyphal system forming the ascogenous system are immersed in a gela- tineous matrix. C. Longitudinal section through mature ascocarp at its edge. The upper hyphal system is vertically oriented at the edge of the contained hymenial area. Source : MNHN, Paris Don R. REYNOLDS 258 q sazodsoase sap Sane anur anbsy 2 "[ojeoide asseu ef ap aits 'apeside aiquieyo = ad toxed e| juonbipur saupa[ se 'anbse,p ajentur a ] sa1odsoose poj[aotq (iA ѕпоѕе әлцеуу "0 osseu a jo -oospaig в Шем Áietutid ayeorpur smoury :ә8е1 умо18 enrur ur j[92 snose Suno,, "V "ara sdoosoaorr {+} sanen овеца я = zu) aan tosed e anbse un,p aueSorodsooseaad 9 aunaf `y “anbudo a1d02s01o1u uə 24009 varDU0q/n9 DULWasy,P anbsy — s "Ba soquieyo eotde = юш) пем әлцеш цим snose sisauaBozods TS - `S Въ Source : MNHN, Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 259 The sympodially produced asci originate at irregular intervals from the secon- dary branches. The ascus initial cell enlarges somewhat in width, but mostly in length. Growth in the initial stages is accompanied by the deposition of wall mate- rial in an encompassing primary layer (Fig. 5 A). A single nucleus can be demons- trated in the cell at this stage with phase microscopy in both recently collected and KOH reconstituted dried material. The formation of the secondary ascus wall is apparent when the ascus initial cell reaches a height of 60-70 um (Fig. 5 B). This material forms an apical dome in the apex of the ascus which has a conspicuous extension of the protoplast into its center (Figs. 5 B-C). The longitudinally oriented striae of the nasse apicale can be demonstrated with the light microscope as was done previously (REYNOLDS, 1971). The striae are somewhat difficult to see with the ascus in midfocus in lac- tophenol but are discernable when the ascus is stained with IKI, both with and without KOH pretreatment. They also become better seen with a slight distor- sion of the ascus apex in a microscope mount ; the striae are more prevalent in the ascus with formed ascospores and before pigmentation develops in the ascos- pore wall. A single nucleus can be demonstrated in the cell at this stage with phase micros- copy. The ascus undergoes a change in its shape during ascosporogenesis resul- ting in a different morphology of the secondary wall material in the ascus apex and in the overall outline of the ascus (Figs. 5 B-C]. The primary ascus wall, illuminated as a heavy line in Figs. 9 C-D, stains blue in Sudan Black B. The results with dilute and strong solutions of IKI and Melt- zer's solution are given in Table 1. The use of the term « couche » to interpret the ascus wall introduced by BEL- LEMERE (1971) can be used to label the layers of the mature ascus wall. A com- parison of the ascus in mid- or near midsection with a tangential section is made in order to give additional characterization to each Couche. ‘The encompassing primary wall is comprised of two layers seen and can be iden- tified in the mature ascus as comprising Couches A and B (Fig. 6). Couche A is a densely staining external layer ; Couche B consists of a wall matrix with the same, but less dense, parallel-to-the-surface orientation of the wall components. REACTIVE ASCUS | IODINE TREATMENT WALL COMPONENT No Pretreatment Pretreatment. IKI Meltzer's | IKI Meltzer's Primary ascus wall BB b = --- Secondary ascus wall Dome Inner surface Table 1 — Amyloidity in the ascus of Asterina carbonacea Cooke. Protocol followed was that of Baral (1987). The color resulting from the application of iodine in IKI and Meltzer’s solutions and with and without pretreatment of the ascus with KOH are tabulated (BB = blue in high and low iodine concentration ; -- - = no reaction; b = blue ; 1b = light blue) Tableau 1 — Réaction amyloide de l'asque d'Asterina carbonacea Cooke. Tableau des colorations obte- nues par les solutions d'iode dans l'IKI et de Meltzer, avec ou sans prétraitement de l'asque par KOH [protocole selon Baral, 1987 ; BB = bleu pour des concentrations en iode élevées et faibles ; - -- = aucune réaction ; b = bleu; 1b = bleu clair]. Source : MNHN, Paris 260 Don R. REYNOLDS Source : MNHN, Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 261 ‘The formation of the two-layered secondary ascus wall begins with the deposi- tion of Couches C and D. Couche C is apparent as a zone between Couche B and Couche D, recognizable by an abrupt difference in the microfibrillar distribution pattern. There are two regions of Couche D which are visible with the resolution of the electron microscope (Figs. 6-7) but not with the light microscope (Fig. 5). The Cou- che D layers are fully deposited prior to ascosporogenesis. Couche D1 is periphe- rally deposited on the inner surface of Couche C. Fig. 7 — Asterina carbonacea Cooke. Asci (T.E.M.). Three mature asci with one or two cells of the bicel- lular ascospores (+) and the apical chamber (small arrows). A discharged ascus (large arrow pointing in the direction of the ascospore expulsion) can be identified in this hymenial section. Fig. 7 — Asques d’ Asterina carbonacea Cooke (M.E.T.. Trois asques mars contenant les ascospores bicel- lulaires (+) et la chambre apicale (petites flèches). Un asque vidé [large flèche pointée dans la direc tion de l'expulsion des ascospores) est visible sur cette coupe de l'hyménium. Fig.6 — Asterina carbonacea Cooke. Longitudinal sections in slightly off-center views (T.E.M.] A. View of tip of ascocarp near wall (aw), showing the tip of an ascus with a mature wall which contains two immature ascospores (.), Note the gelatineous matrix (g) surrounding the ascus. The arrows indicate the stress zone just above the tangential view of the nasse apicale which is formed during ascosporogenesis as the ascus accommodates the developing ascospores. B. An enlarged sec tion of A. Couche A (a) and Couche B (b) are the outermost layers, with Couche C not well demons- trated. Couche D1 (di) is indicated in the area outlined by the small stemless arrows with Couche D2 (d2) evident by the banded layers. The immature ascospores (x) lack walls. С. Oblique tangential section through ascus apex. Couches A-D (a, b, c, d) are demonstrable. Stressed layer created by wall reorientation during ascospore formation is seen in a lateral region above Couche D2 (small arrows). Fig. 6 — Coupes longitudinales d'asques d'Asterina carbonacea Cooke (M.E.T.). A. Sommet de l'ascocarpe prés de la paroi [aw), montrant l'apex de l'asque avec une paroi mûre qui entoure 2 ascospores imma: tures (.). Noter la matrice gélatineuse (g) entourant l'asque. Les flèches indiquent la zone de scission juste au-dessus de la nasse apicale (vue tangentielle) qui est formée pendant l'ascosporogenèse. B. Détail de A. La couche À (a) et la couche B |b} sont les couches extrêmes, la couche C est peu distincte. La couche DI (d1) est la zone définie par les têtes de flèches et la couche D2 [d2) montre différentes strates. Les ascospores immatures |.] n'ont pas de paroi. C. Coupe tangentielle oblique dans l'apex de l'asque où l'on peut voir les couches A à D (a, b, c, d). La zone de scission créée par la réorientation de la paroi au cours de la formation des ascospores est située dans la région latérale au-dessus de la couche D2 [petites flèches). Source : MNHN, Paris 262 Don R. REYNOLDS Couche D1 has the banded pattern of the bitunicate endotunica (REYNOLDS, 1971). Dark-staining microfibrils are embedded in the amorphous wall matrix with an orientation that is generally horizontal to the protoplast surface. Additionally, the embedded microfibrils form a reoccurring pattern of verticle bands. The peaks and valleys of undulations in the wall give definition to the band boundaries. Cou- the D1 forms a slight bulge (Fig. 6) at the lower edge of the Couche D2 dome and becomes thinner toward the ascus apex. Couche D2 is deposited last and is found in the upper third of the ascus as a dome-shaped layer (Fig. 6). The microfibrillar deposition pattern of Couche D2 in asci with developing or mature ascospores has lines that run across and per- pendicular to the vertical band zones (Figs. 6 A-B, 7). These lines have a discer- hibly different arching angle in the preascosporogenic and the post ascosporogenic ascus. There is a noticeable density in these lines immediately over the nasse api- cale. These lines appear to be « stretch marks » formed during ascosporogenesis as a result of the stress in the wall layers induced during the accommodation of the developing ascospores. Fig. 8 — Asterina carbonacea Cooke. Comparative light and electron microscopic views of discharged asci A. Ascus with wall extended beyond disrupted wall (arrows) [light microscope]. This view demons trates the possibility that the ascus can be interpreted as bitunicate at this resolution. As discerned from Fig. B, Couche D2 (D2) extends beyond the remaining portion of the wall arrows). B. View similar to A of the ascus discharge apparatus with the resolution of the transmission electron micros cope. The ascus breaks (small arrows) to allow an extension of the ascus wall which is formed from Couche D2. Couche D2 remains unseparated from the Couches A-D1 portion of the ascus wall (indi cated between large arrows} Fig. 8 — Asterina carbonacea Cooke. Comparaison des clichés de microscopie optique et électronique d'asques vidés. A. Asque montrant une paroi étirée au-dessus de la paroi déchirée (flèches) (micros- copie optique]. Ce cliché montre que l'asque peut être interprété comme bituniqué à ce grandisse ment. Comme on peut le voir sur la Fig. B, la Couche D2 (D2) s'étend au-delà des restes de la paroi [flèches]. B. Vue correspondant à la Fig. A, avec la résolution du microscope électronique à trans: mission, L'asque s'ouvre (petites flèches) pour permettre une extension de la paroi ascale, formée à partir de la couche D2. La Couche D2 reste liée aux Couches A-D1 de la paroi ascale (portion indi: quée entre les grandes flèches] Source : MNHN. Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 263 An apical extension of the protoplast is maintained from the beginning of the Couche D2 wall deposition (Figs. 5-9). The usual position of the apical extension is in a line on the approximate axis of the ascus. The structural integrity of the ascus apex extension and the Couche D2 socket into which it fits can be demons- trated in squash mounts in which the protoplast is mechanically separated from the ascus cell wall. Occasionally a slight separation occurs immediately above the ascus apex extension, forming a spacial artifact, The inner-wall surface interface with the apical cytoplasmic extension is undu- late as a result of the underlying surface configuration of the banded pattern Cou- che D1. This feature can be identified with a through-focus examination which demonstrates an overlapping array of curving focus-planes formed by the band boundaries. The spiral rods formed from the optical properties of the protoplast inner-wall surface can be seen in some microscope preparations. Ascosporogenesis occurs after the formation of the ascus wall is completed. Most of the asci are eight-spored, althrough some were seen to have only four pigmen- ted ascospores. The ascus shape changes as the ascospore initials are formed, pre- sumably during meiosis and especially during the latter stages when the ascospore wall is deposited. With the formation of the ascospores, the ascus assumes a more rounded shape. During this stage, the Couche D layers undergo further modification as the ascus stretches to accommodate the developing ascospores (Figs. 5 B-C, 6). At ascos- pore release, the outer wall layer splits (Figs. 8, 9). The Couche D2 layer extends as a tube. Contrary to the impression gained from light microscopic viewing (Fig. 8 A), there is no separation of the Couche D2 layer from the other wall layers (Figs. 8 B, 9). The orientation of the microfibrils in the wall matrix after ascospore eja- culation indicate no upward displacement from the original interface of Couche DI and Couche D2 (Fig. 8 BI. The ascospores leave the ascus in single-chain formation (Fig. 9 DJ and exit the extended wall via the unmodified, open apical end of the surrounding tube (Figs. 8-9). The expended asci, consisting of the collapsed lower wall and the tubular extension of the secondary wall, often remain in situ in the hymenium DISCUSSION The results of this study support a recognition of the asterinaceae and related families as a sister group to the loculoascomycetes which were defined by LUT- TRELL (1955) as « Ascis bitunicatis, in ascostromate evolutis ». The Asterina ascus cannot be equated with the bitunicate ascus as defined by LUTTRELL (1951) and implicated by ERIKSSON (1984). The ascus structure is similar to that described by HONEGGER (1978) as the « type eu-archaeascé of LETROUIT-GALINOU, 1973 » that ERIKSSON (1981) termed « rostrate ». The asci from Asterina correicola Cooke & Massee and Asterina sp. were said to develop from proliferating croziers (SWART, 1969). Their development and the sympodially produced asci of A. carbonacea originate in a manner suggestive of the mode of ascus formation discussed by PARGUEY-LEDUC (1977) as « Dan- geardies simples ». The asci of Placoasterella baileyi were found to arise from a terminal cell of the fertile member of a duel hyphal system making up the asco- Source : MNHN. Paris Don R. REYNOLDS Sol urce : MNHN. Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 265 carp (TYSON & GRIFFITHS, 1976a). The ascus-bearing cell was noted to ultima- tely be connected to a binucleate penultimate cell. THEISSEN (1913) described the ascus of the genus Asterina species as having a double tunica with the inner sporesack tightly surrounding the spores and the outer, mostly very thin, slimy tunica. The illustrations of the ascus in this early review of the genus Asterina indicate a thick nonlayered wall delimiting the ascus ; no details of the apical region were provided. The outer tunica was likely a refe- rence to the reaction that was obtained when iodine was applied to the ascus in several species. Sudan Black B stains for total lipids (O'BRIEN & McCULLY, 1981). The blue reaction in asci without KOH pretreatment possibly indicates the presence of iso- lichenin (CULBERSON, 1969). The light blue staining of the ascus dome and the darker blue reaction of the inner surface of the secondary wall with KOH pre- treatment might be indicative of curled molecular segments presents in the secon- dary wall material which is destined to undergo stretching (BARAL, 1987). Spore ejaculation triggers the phenomenon which is the historic basis of cha- racterization of the bitunicate ascus (LUTTRELL, 1951). The primary wall ruptu- res in the apical region and slides down the secondary wall which stretches into a tube through which the ascospores are distributed (REYNOLDS, 1971 ; BEC- KETT & al., 1974 ; BEZERRA & KIMBROUGH, 1982 ; PARGUEY-LEDUC, 1977; PARGUEY-LEDUC & JANEX-FAVRE, 1982 ; BELLEMERE & HAFELLNER, 198 NIYO & al., 1986]. Fig, 9 — Diagramatic representations of the Asterina carbonacea Cooke wall structure as seen in light and electron microscopic views. A comparison of the undischarged ascus with the ascus with the inner wall extended. A. The undischarged ascus in an electron microscopic view. B. The discharged ascus in an electron microscopic view. At ascospore discharge, the ascus wall will rupture (X] near where Couche D1 forms an enlargement and adjacent to the Couche D2 or « apical dome » portion of the ascus. Stress lines are formed over the nasse apicale (NA) in Couche D2. Couche D2 extends beyond the remainder of the ascus wall (S) at the rupture (X). C. The undischarged ascus in a light microsco- pic view. The primary wall (PW) encloses the secondary wall which is largely deposited as an apical dome (DO) where an apical chamber with a nasse apicale (NA] occurs. The bicelled ascospores (AS) are contained in an oval chamber shaped during ascosporogenesis by the stretching of the secondary wall material. D. The discharged ascus in a light microscopic view. The primary wall (PW) splits to allow the extension of the inner elastic wall (EW). The ascospores [AS] distend the inner canal of the extended wall as they are discharged from the lower portion of the ascus. The arrows indicate. direction of ascospore discharge in the undischarged ascus. A = Couche A, B = Couche B, C = Couche €, Di = Couche D1, D2 = Couche D2. Fig. 9 — Représentations schématiques de la structure de la paroi d' Asterina carbonacea Cooke, observée au microscope optique et électronique. Comparaison d'un asque fermé et d'un asque dont la paroi interne est étirée, A. Asque fermé, en microscopie électronique. B. Asque ouvert, en microscopie électronique. A l'éjection de l'ascospore, la paroi de l'asque se rompt (X) à l'endroit où la Couche DI est élargie et adjacente à la couche D2 (« dóme apical » de l'asque]. Des lignes de scission se créent dans la couche D2, au-dessus de la nasse apicale (NA). La Couche D2 s'étire au-delà de la paroi ascale (S) au point de rupture (X). C. Asque fermé, en microscopie optique. La paroi primaire (PW) entoure la paroi secondaire qui forme un dôme apical (DO) oà apparait une chambre apicale avec une nasse apicale (NA), Les ascospores bicellulaires (AS) sont contenues dans une chambre ovale formée au cours de l'ascosporogenèse par une extention de la paroi secondaire. D. Asque ouvert, en microsco- pie optique. La paroi primaire [PW] se divise pour permettre l'extension de la paroi élastique inté- rieure (EW). Les ascospores (AS) distendent le canal interne de la paroi lorsqu'elles sont expulsées de la partie inférieure de l'asque. Les flèches indiquent la direction de l’6jection des ascospores dans l'asque fermé. À = Couche À, B = Couche B, C = Couche C, D1 = Couche D1, D2 = Couche D2 Source : MNHN, Paris 266 Don R. REYNOLDS The technique stressed by BELLEMERE (1971) and other French workers for observations on the ascus wall structure at the resolution of the electron micros- cope is that attributed to THIERY (1967) ; the deposition patterns of the polysac- charides comprising the ascus wall were enhanced with thiocarbohydrazide or thiosemicarbazide and with silver proteinate staining. On the other hand, other recent workers such as HONEGGER (1985) and NIYO & al. (1986) were able to discern the wall patterns with the use of uranyl acetate and lead citrate, as was done in this study. I believe that the Thiéry Technique is very useful for impro- ving the constrast of micrographs but is not a neccessity for the interpretation of the ascus wall structure. The Asterina ascus appears bitunicate at the resolution of the light microscope (Fig. 9 A). The formation of this ascus follows the same sequential pattern as that of the bitunicate ascus (REYNOLDS, 1971). Yet, the wall structure is not the same (Fig. 9). The distribution of the banded pattern secondary wall, Couche D (BEL- LEMERE, 1971), is different than that of the bitunicate ascus with separable wall. The Couche D layer is characterized by the vertical band pattern of the bitunicate ascus, yet this secondary wall material is measurably more concentrated in the apical portion of the ascus. The bulge of Couche D1 at the point where Couche D2 begins is suggestive of the thickening of the wall found by SAMUELSON & KIMBROUGH (1978) in Thelebolus polysporus (Marst.) Otani & Kanzawa. Unlike the ascus of that species, the upper portion of the Asterina ascus wall does not undergo a separation into an ectotunica and an endotunica during spore ejacula- tion. Couche D2 stretches into a tube without separation from the rest of the wall. The ascospores are dispersed through the resultant channel in the extension of the wall. The presence of density lines that run parallel to the periphery of the ascus and across the vertical columns of the banded pattern are an indicator of the reorien- tation of the secondary wall material during ascospore formation. The increase in density of these lines just above the nasse apicale might result from the focus of stress in the stretching ascus at that pivotal point ; the meniscus reported by ERIKSSON (1981) likely results from mechanical disruption of the wall at this stress point. Applying the observation of MARTIN & al. (1976) that the « contorted plas- malemma » is related to an increase in the ascus volume, I suggest that Couche D1 absorbs the changes in the ascus wall during ascosporogenesis while Couche D2 functions during ascospore dispersal. The definition of an ascostroma in HAWKSWORTH & al. (1983) is a stroma in or on which asci are produced ; the term was said by them to be usually restric- ted to groups with ascolocular ontogeny. These editors give the definition of Asco- loculares as ascomycetes having asci developing in cavities in a preformed stroma. An alternate term, pseudothecium, was defined as an ascostromatic ascocarp having asci in numerous unwalled locules. The ascocarp formation by Asterina, inclu- ding A. carbonacea, was investigated by GAILLARD (1893) who found that the fruitbody developed from a hyphal cell before the appearance of the ascus. RYAN (1926) confirmed this sequence in eighteen illustrated species of Asterina The ascoma of Asterina begins from a hyphal cell that, in turn, is the source of a duel hyphal system. The first developed system forms the ascocarp, and the second forms the ascogenous system. Therefore the ascoma is an ascostroma sensu LUTTRELL (1951). Source : MNHN. Paris THE ASCUS OF ASTERINA CARBONACEA 267 The systematic implication of this study is that broached by LUTTRELL (1955) in his discussion of the exceptions (the Coryneliales and the Coronophorales| to the definition of the subclass Loculoascomycetes because of the occurrence of a nonbitunicate ascus in an ascostroma. Extrapolating the results of this study, the groups pointed out by LUTTRELL (1973) as having an ascus that is « globose to broad oblong or clavate (less than 3 times as long as broad) » apparently also com- prise a major exception to his definition. This ascus type is found in the Asterina- ceae as well as the Seuratiaceae and possibly other ascostromatic families such as the Philipselliaceae. These families are predicted as nonbitunicate-ascus ascos- tromatic, but not Euascomycetes, sister taxa that are phylogenetically near the ascostromatic ascomycetes with a bitunicate ascus. REFERENCES ARNAUD A., 1918 — Les Astérinées. Thése, Faculté des Sciences de Paris. 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Paris Cryptogamie, Mycol. 1987, 8 (4) : 269-288 269 REMARQUES À PROPOS DE L'ULTRASTRUCTURE D'ASCOSPORES « ALBINOS » OU « GRANULEUSES » DE MUTANTS D'ASCOBOLUS IMMERSUS PERS. (gène bs). par L.M. MELENDEZ-HOWELL’, A BELLEMERE** et J.-L. ROSSIGNOL*** RÉSUMÉ — Les ascospores du mutant albinos [gene bs) de l'Ascobolus immersus outre leur défaut de pigmentation présentent certains caractéres ultrastructuraux du mutant granuleux [sur le même gène) en particulier une périspore interne discontinue se limitant a des loupes. Une modification du métabo- lisme lipidique associée a la perturbation de certains échanges entre l'ascospore en développement et l'épiplasme de l'asque parait accompagner l'absence de pigmentation des albinos. SUMMARY — In Ascobolus immersus the non pigmented ascospores of the albino mutant (bs gene) show some ultrastructural characters of the granular mutant (on the same gene) specially a discontinuous internal perispore restricted to a few lens. The absence pigmentation albino mutant spores is probably associated to a modification of lipid metabolism in connection with perturbations of the exchanges between the developing ascospore and the ascus epiplasm. MOTS CLES : Ascobolus, ascospores, mutants, pigmentation, lipides. * UA 257, CNRS, Laboratoire de Cryptogamie du Muséum d'Histoire Naturelle, 12, rue Buffon, F 75005 Paris, France. ** Laboratoire de Mycologie, Ecole Normale Supérieure de Lyon (Services de Saint-Cloud}, Grille d'Hon: neur, Parc de Saint-Cloud, F 92211 Saint-Cloud Cedex, France. *** Laboratoire IMG, Bátiment 400, Université Paris-Sud, F 91405 ORSAY Cedex, France Source : MNHN, Paris 270 L.M, MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL Chez le champignon Ascomycète hétérothallique Ascobolus immersus 19 gènes contrôlent la couleur de l'ascopore (NICOLAS & al., 1981). L'examen ultrastruc- tural du développement des ascospores chez deux mutants (gene bs) de l' Ascobo- lus immersus l'un & ascospores albinos (bs) et l'autre A ascospores granuleuses (bs-g) fait suite à une étude de la souche sauvage et de deux mutants (gène bz), l'un à ascospores « albinos » et l'autre à ascospores « ceinturées » publiée anté- rieurement (BELLEMERE & al., 1981). Les techniques mises en ceuvre, les défi- nitions des divers constituants morphologiques, de la paroi ascosporale, et celle des principaux stades de leur développement utilisées ici ont été indiquées dans cette précédente publication. RÉSULTATS I - Les ascospores du mutant albinos (gène bs) (PL.I à IV ; Fig.1 A1 à Gi). Dans ses grandes lignes, le développement des ascospores de ce mutant est ana- logue à celui de la souche sauvage et des mutants sur le gène bz. Il présente cependant quelques caractères originaux et remarquables qui seront analysés suc- cessivement. 1. Les loupes de la périspore. L'essentiel de la périspore, Patag+, qui correspond à la périspore moyenne de la souche sauvage contient dans sa partie la plus profonde des portions Patag — lappelées ici loupes) en forme de lentille plan-convexe dont la face saillante est dirigée vers l'extérieur. Ces lentilles n'existent pas encore au tout début du déve- loppement de la paroi ascoporale (Pl.I-B ; Fig. 1Aı]. Au plus jeune stade où on les observe elles sont nettement hémisphériques [PLI-C ; Fig. 1B1]. Chaque spore n'en contient que quelques-unes. La base plane de ces loupes est séparée de la paroi intermédiaire de la spore par une trés mince couche (cs), plus dense et un peu plus réactive que le reste de la périspore (PI.I-C, E ; Fig. 1Bi). Au contact de la face convexe de chaque loupe, le contenu de celle-ci devient trés clair, formant une trés mince zone externe (ze), finement irrégulière, bien distincte (PL.I-C ; Fig. 1Bi). À un stade un peu plus аве [PI.II-A ; Fig. 1Ci), une masse interne (mi) sub- sphérique, d'aspect plus foncé, se forme dans la loupe tandis que la mince cou- che basale sombre est un peu moins réactive. Plus tard, cette masse interne envahit la majeure partie de la loupe (PI.II-C, D, PI.IILB ; Fig. 1D1, Ex). La substance fon- damentale originelle (so) de celle-ci se réduit désormais à des lambeaux périphé- riques dont la texture est plus ou moins irrégulièrement vésiculeuse. L'étroite zone claire (ze) qui borde la loupe vers l'extérieur s'épaissit un peu ; on y discerne de fins trabécules radiaires mettant en relation la partie interne de la loupe avec la périspore. Quand la spore est mûre (PL.IV-A ; Fig. 1F1, Gi), la masse interne de la loupe est devenue plus réactive ainsi que les lambeaux de la substance origi- nelle ; sous la loupe, la mince bande de périspore (cs) est maintenant revétue d'une étroite couche claire qui fait suite vers l'intérieur à cette zone externe transpa- rente de la loupe. La zone externe claire de la loupe s'est épaissie aux endroits oü persistent des lambeaux (la) de la substance originelle de la loupe. Elle vient plus ou moins faire saillie dans la périspore et les loupes paraissent ainsi un peu boursouflées. Source : MNHN, Paris ASCOSPORES D'ASCOBOLUS IMMERSUS 271 Fig, 1 — Abscobolus immersus. Schémas du développement des loupes de la périspore chez deux mutants du gene bs, l'un albinos (A1 à G1) et l'autre granuleux [A2 à G2}. Voir le texte. Fig. 1. — Abscobolus immersus. Schemes of the development of perispore lens in two mutants of b8 gene ; one is albino (A1 to G1], the other is granular (A2 to G2). See the text. Source : MNHN. Paris 272 L.M. MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL. 2. Les vésicules de la périspore. Outre les loupes, la périspore contient aussi, à certains stades, de nombreuses vésicules subglobuleuses de tailles diverses et d'aspect clair (PL.II-C ; Fig. 1D1). Ces vésicules n'apparaissent pas avant qu'une masse interne ne se soit formée à l'intérieur de chacune des loupes (PL.II-A). Au début, elles sont toutes de petite taille et leur contenu est transparent (PL.II-B ; Fig. 1C1). Ultérieurement, à la périphérie de la spore, on observe aussi de grosses vesicu- les à contenu légérement réactif (PL.Il-C, IIl-D, IV ; Fig. 1D: à Gi) Ceci porterait à croire que les petites vésicules naissent dans la partie profonde de la périspore, se déplacent de facon centrifuge en s'accroissant sans doute par fusion. Des figures semblent indiquer que certaines grosses vésicules peuvent con- fluer avec la limitante externe de la spore et libérer leur contenu à l'extérieur (PL.IN-D). Il est remarquable que, dans les spores âgées, la structure de ces grosses vésicu- les soit analogue à celle des loupes (PLIV-A à D ; Fig. 1G1) 3. La surface externe de la spore. La surface de la très jeune ascospore montre des ondulations assez profondes, relativement étroites et régulières (PLI-A ; Fig. 1A1). Rapidement celles-ci s'atté- nuent très nettement (PI.I-B, C ; Fig. 1B1). Quand des vésicules sont présentes dans la périspore [PL.II-C], des dépóts localisés et réactifs viennent se plaquer sur la spore ainsi que sur la surface interne de l'ċpiplasme (Pl.IIl-C). La surface de la spore devient ensuite irrégulière (PI.II-D, IMI-D ; Fig. 1D: à Fi) : elle forme des extrusions étroites et minces. Recouvertes de dépóts réactifs en forme de goutte- lettes, celles-ci ont un aspect caractéristique qui rappelle celui d'un chapelet de saucisses (PI.IV-D ; Fig.1Gi). 4. La structure de la paroi intermédiaire de l'ascospore. Elle est toujours complexe et d'analyse difficile en raison de sa minceur et d'arté- facts résultants de défauts, même minimes, de l'orthogonalité des coupes. On a vu plus haut que sous les jeunes loupes existe une mince couche basale de péris- pore nettement plus réactive (PL.I-C, E ; Fig. 1В1). Sous celle-ci, une mince cou- che blanche est assez bien marquée (PI.I-C) a l'extérieur d'une couche castor faiblement réactive au début. Quand une masse interne sombre se développe dans les loupes, la partie la plus interne de la périspore devient plus réactive sur toute l'étendue de la spore et non pas seulement sous la base des loupes (PLIIL-A ; Fig. Ei). Puis, ultérieurement, cette mince couche réactive disparait (Fig. 1F1) ; en dehors des loupes, la couche blanche devient plus épaisse et elle est clivée par une très mince lamelle réactive [PLIII-B ; Fig. 1F1) qui est d'ailleurs transitoire (PLIV-B ; Fig. 1Gi). 5. Les globules lipidiques du sporoplasme. Ces globules lipidiques, qui sont toujours relativement abondants, sont surtout remarquables dans les jeunes ascospores encore dépourvues de loupes (PI.l-B, D) A ce stade, en effet, certains d'entre eux paraissent entourés d'une mince zone claire d'épaisseur irrégulière bordée d'une membrane comme s'ils étaient conte- nus dans un compartiment de séquestration. Source : MNHN, Paris ASCOSPORES D‘ASCOBOLUS IMMERSUS 273 Dans les ascospores mares (PI.IV-E}, les globules lipidiques ont un aspect banal ; ils sont légérement plus réactifs au test de Patag vers l'extérieur et contiennent quelques grains plus opaques aux électrons. On sait que les ascospores des mutants albinos (géne bz) différent des ascospo- res sauvages non seulement par l'absence de pigmentation de la partie la plus pro- fonde de la périspore [périspore interne) mais, de plus, par la structure de la surface sporale, de la périspore moyenne, de la paroi intermédiaire et des globules lipidi- ques du sporoplasme (BELLEMERE & al., 1981]. Les ascospores du mutant albinos (géne bs), elles aussi dépourvues de pigment, diffèrent cependant des ascospores précédentes. _ Tout d'abord, leur périspore interne ne forme pas une couche continue, mais est réduite à des loupes séparées, ce qui est inattendu. — De plus, leur surface est beaucoup plus irrégulière, avec des extrusions impor- tantes. — Leur paroi intermédiaire ne présente pas de lamelle noire permanente et leur périspore moyenne ne contient pes de granules Patag +. — Enfin, les globules lipidiques de leur sporoplasme n'ont pas l'aspect caracté- ristique « en passoire » de ceux de l'albinos b2. L'étude d'un autre mutant de ce gène bs (mutant granuleux) permet d'appor- ter quelques éclaircissements à propos de ces modifications structurales. II - Les ascospores du mutant granuleux (gène bs) (P1.V a VIII ; Fig.1 A2 à G2). Seules certaines parties de la surface de ces ascospores sont pigmentées, ce qui leur confére un aspect granuleux au microscope photonique. Dans ses grandes lignes, le développement de ces ascospores est analogue à celui des ascospores du mutant albinos (gène bs). Toutefois, en fin de maturation, un dépôt pigmentaire se forme dans la paroi sporale. On n'envisagera ici que les points remarquables de ce développement. 1. Les loupes de la périspore. Chez les ascospores du mutant granuleux (gène bs), la périspore comporte des loupes dont la structure et le développement sont analogues à ceux décrits plus haut chez le mutant albinos (РІ.У-В, р, Е; УГА; VII-A, B ; Fig. 1A2 à G2). 2. La pigmentation. L'aspect granuleux de la spore résulte de sa pigmentation qui affecte essentiel- lement la masse interne de chacune des loupes et de façon moins intense et, plus tardive, la substance fondamentale qui entoure celle-ci ainsi que la couche castor de la paroi intermédiaire (Fig. 1G2) Les premières traces de pigmentation apparaissent d'abord de façon dispersée dans la masse interne des loupes, sous forme de petits grains très fins bien réac- tifs au test de Thiéry (PI.VII-A ; Fig. 1E2). Source : MNHN, Paris 274 L.M, MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL Plus tard (PL.VII-B), des granules de pigmentation plus gros se forment dans la masse interne des loupes. Ils sont constitués d'une masse amorphe peu réactive contenant un nombre réduit de petits grains fortement Patag +. Ces granules peu- vent, çà et là, être plus ou moins fusionnés en bâtonnets sinueux, surtout vers la périphérie de la masse interne (PI.VII-B, VIII-A ; Fig. 1F2). Dans les lambeaux de substance fondamentale de la loupe apparaissent alors de petits grains très fins, dispersés, moins réactifs que ceux des granules (PI.VII-B). Ultérieurement, les bâtonnets sinueux de la périphérie de la masse interne de la loupe deviennent plus nombreux, se soudent plus ou moins les uns aux autres et forment ainsi une sorte de mince croüte irrégulière autour de cette masse (Р.УШ-В). Quand la spore est mare (PI.VIIL-C ; Fig.1G2), la densité et la réactivité de la masse interne des loupes sont renforcées par des sortes de cannelures qui résul- tent probablement de la fusion de nombreux bâtonnets sinueux mentionnés plus haut. Ces cannelures irrégulières, rapprochées, très réactives, sont plus ou moins parallèles et disposées un peu obliquement par rapport au plan équatorial de la spore. La partie centrale de la masse interne des loupes peut être dépourvue de cannelures (PI.VII-C) et présenter alors un aspect grisâtre assez uniforme. Au cours de la maturation, la substance fondamentale de la loupe continue à se charger de pigment, et, par suite, son aspect devient alors analogue à celui que présentait, au début, la masse interne ; elle ne semble pas être pigmentée davantage quand la spore est mûre. La couche castor se charge peu à peu de pigment et à la fin devient très dense et très réactive. 3. La structure de la périspore. La périspore des ascospores granuleuses (PI.VI-A, E ; Fig. 1D2) a une structure analogue à celle des ascospores albinos (géne bs). Elle contient des vésicules dont les plus externes, qui sont plus grosses, semblent aussi pouvoir se déverser a la surface de la spore. Certaines de ces grosses vésicules peuvent contenir des gra- nules de pigmentation (PI. VII-B]. 4. Surface sporale. Elle rappelle celle des ascospores albinos (gène bs) aux stades jeunes (РІ.У-А ; Fig. 1A2) comme aux stades plus âgés. Lors de ceux-ci, on y observe aussi des extrusions en forme de « chapelets de saucisses » parfois plus spectaculaires encore que celles du mutant albinos (PI.VL-C, D ; Fig. 1D2 a F2). La surface de la spore mûre est aussi trés irréguliére [PL.VIL-A ; Fig. 1G2). 5. Paroi intermédiaire. Aux jeunes stades du développement (PI.V-B, C, D ; Fig.1Bz, C2), la base de la périspore est renforcée d'une mince couche basale lamellaire trés réactive au test de Thiéry (mais no: active au citrate ; РІ.У-Е) qui recouvre la couche blanche de la paroi intermédiaire sur toute la surface de la spore. Un peu plus tard, une trés mince couche claire, Patag —, apparait à l'extérieur de la couche basale (PI.VI-A ; Fig. 1D2) et cela sur toute la surface de la spore ; son épaisseur d'abord irrégulière surtout sous les loupes, s'uniformise ensuite. La couche basale réactive se trouve ainsi placée dans la position de la lamelle noire observée chez les ascospores de la lignée sauvage, au milieu de la couche blanche de la paroi intermédiaire. Source : MNHN, Paris ASCOSPORES D’ASCOBOLUS IMMERSUS 275 Plus tard, lorsque les grains fins de pigmentation commencent a se déposer (PI.VII-A ; Fig. 1Е2), Іа lamelle noire perd sa réactivité en dehors des loupes. Bien- tat elle ne forme plus sous celles-ci que de trés courtes striations transversales, fines et contigués (Patag +) (PI.VILB ; Fig. 1F2) et elle s'efface plus ou moins com- plċtement sur le reste de la surface sporale. Quand les spores sont mares, la lamelle noire n'est plus distincte (PI.VIII-C ; Fig. 1G2) 6. Les globules lipidiques du sporoplasme. Ces globules (PI.V-E, VB) ont un aspect analogue à ceux de la lignée sauvage ; a la périphérie, ils sont un peu plus granuleux que ceux du mutant albinos (gene bs). En dehors de la pigmentation des loupes, les différences ultrastructurales entre le mutant granuleux (gène bs) et le mutant albinos (gene bs) sont faibles : chez les deux mutants la structure de la périspore est analogue, la surface sporale pré- sente également des extrusions bien marquées, les différences dans l'aspect des globules lipidiques du sporoplasme et dans la paroi intermédiaire de la partie pro- fonde sont légères. CONCLUSION Il est remarquable que la mise en place du caractère albinos portant sur le gène bs s'accompagne de l'établissement d'un caractère propre au mutant granuleux [limitation de la périspore interne à des loupes séparées) et que les caractères ultra- structuraux distinctifs du mutant albinos soient des modulations de ceux du mutant granuleux, le mutant albinos étant en quelque sorte une expression extréme du mutant granuleux. Pour comparer utilement les albinos bz et bs, il convient donc de faire abstrac- tion chez ce dernier des caractères propres au mutant granuleux, pigmentation mise à part. Alors il apparaît que les modifications qui, chez ces deux mutants, accompagnent l'absence de pigment sont relativement discrètes et en nombre réduit : structure et localisation (vacuolaire ou non] des globules lipidiques du spo- roplasme, détails de l'organisation de la paroi intermédiaire de l'ascospore (mince couche réactive externe et lamelle noire], importance relative des irrégularités de la surface sporale. Parmi ces caractéres, ce sont ceux des globules lipidiques qui sont les premiers perceptibles au cours du développement ; leur particularité est méme affirmée avant la formation des loupes chez les albinos bs L'expression du caractère albinos est donc directement en relation avec le méta- bolisme lipidique de la spore. La modification de celui-ci semble perturber les échanges entre la spore et l'épiplasme de l'asque car, non seulement la surface sporale est affectée, mais aussi la paroi intermédiaire dont on a déjà suggéré qu'elle pourrait jouer un rôle important dans le contrôle de ces échanges (loc. cit). La voie vers l'absence de pigment s'établit donc assez précocement mais se ble être indépendante ou avoir des rapports très lâches avec la voie menant à l'é fication de la structure de type granuleux puisque celle-ci peut s'établir au cours du développement de l'albinos bs. L'étude de doubles mutants, soit entièrement albinos à la fois sur le gène bz et sur le géne bs, soit albinos pour bz et granuleux sur bs, pourrait se révéler inté- ressante en permettant une analyse plus fine des conditions d'expression du carac- tére albinos. Source : MNHN. Paris 276 L.M. MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL REMERCIEMENTS Nous avons plaisir à remercier pour leur assistance technique H., CHACUN et M.-C. MALHERBE pour les coupes ultrafines, M. LETALNET et E. VAST pour les photographies, T. CASSES pour les dessins, E. VADE pour la frappe du manuscrit BIBLIOGRAPHIE BELLEMERE A., MELENDEZ-HOWELL L.M., NICOLAS A. et ROSSIGNOL J.-L., 1981 — Etude ultrastructurale comparative du développement des ascospores chez la lignée sau- vage et chez des mutants à ascospores « ceinturées » ou « albinos » de l'Ascobolus immer- sus Pers. ex. Fr. Cryptogamie, Mycol. 2 : 299-359. NICOLAS A., ARNAISE S., HAEDENS V. and ROSSIGNOL J.-L., 1981 — Ascospore mutants and genetic map of Ascobolus immersus stock 28. J. Gen. Microbiol. 125 : 257-272. Source : MNHN, Paris bl ca cb ce cl bl ca cb cc cl cp cr d ex ASCOSPORES D'ASCOBOLUS IMMERSUS 277 ABRÉVIATIONS DES LÉGENDES DES PLANCHES bâtonnets de pigment le couche blanche In cannelure m couche basale sombre sous les mi loupes р couche « castor » pa couche claire à la base d'une pc loupe couche « pollux » pe croüte pigmentée Pg dépôts pi épiplasme pl extrusion de la surface sporale pm glycogène pp grains fins de pigment 50 globules lipidiques granules de pigment sp loupe spp lambeaux persistant de Y substance originelle de la vp loupe ze limitante externe lamelle noire mitochondrie masse interne de la loupe périspore paroi de l'asque partie centrale de la masse interne périspore externe petits grains de pigments paroi intermédiaire plasmalemme périspore moyenne paroi propre de la spore substance fondamentale originale de la loupe sporoplasme sporoplasme périphérique vacuole vésicule de la périspore zone externe de la loupe ABBREVIATIONS IN PLATES rodlet of pigment le white sheath In fluting m dark basal layer under the lens mi « castor » layer. p clear layer at the basis of a pa lens pe « pollux » layer pigmented crust pe deposits pg epiplasm pi extruded part on the spore pl surface pm glycogen рр small granules of pigment so lipid bodies big granules of pigment sp lens spp persisting shreads of original v lens substance vp ze investing membrane black sheath mitochrondria internal part of the lens perispore ascus wall central body of the internal part external perispore small granules of pigment intermediate wall plasmalemma median perispore proper wall of the spore original fundamental substance of the lens sporoplasm external sporoplasm vacuole perispore vesicle external part of the lens Source : MNHN. Paris 278 L.M. MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL Planche I — Abscobolus immersus, mutant albinos (géne bs]. — A. Contact sinueux entre une jeune ascospore et l'épiplasme [Patag]. — B. Jeune ascopore encore dépourvue de lou- pes [Patag]. Remarquer les globules lipidiques dans des aires claires du sporoplasme (fle- ches) (cf. aussi ID]. — C. Loupe bien développée dans la périspore moyenne (рт) d'une jeune ascospore (Patag). — D. Même ascospore que IB (Patag). Les globules lipidiques (gl) sont inclus dans des structures vacuolaires (flèches). -- E. Détail de la paroi inter- médiaire d'une ascospore un peu plus âgée que IC (Patag). La couche castor (cc) est mince, la couche pollux, sous-jacente, n'est pas encore clairement distincte Plate 1 = Abscobolus immersus, albino mutant (bs gene]. — A. Meandering contact between a young ascospore and epiplasm (Patag). - B. Young ascospore still without lens (Patag). Note the lipid bodies in clear areas of epiplasm [arrows] (cf. also ID). — C.Well developed lens in the median perispore (pm) in a young ascospore [Patag]. — D. The same ascospore as IB (Patag). Lipid bodies are included in vacuolar structures (arrows). — E. Detail of the intermediate wall in a ascospore somewhat older than IC (Patag). Castor layer (cc) is thin, the underneath pollux layer is not yet clearly distinct. Planche II — Abscobolus immersus, mutant albinos (gene bs). — A. Ascospore séparée de l'épiplasme par une large vacuole. Dans une loupe de la périspore une masse interne (mi) se développe [Patag). — B. Présence de nombreuses petites vésicules dans la péris- pore (Patag). — C. La périspore contient de petites vésicules dans sa partie profonde t des vésicules plus volumineuses prés de sa surface oü l'on observe quelques extru- sions. La loupe est presque complètement envahie par la masse interne [mi] (Patag). — D. Des dépôts réactifs (d) sont présents dans la vacuole de l'épiplasme [v] et à la surface de l'ascospsore. La masse interne de la loupe est importante (Patag). Plate II — Abscobolus immersus, albino mutant (bs gene). — A. The ascospore is separated from epiplasm by a big vacuole. In a perisporal lens an internal part (mi) is developing (Patag). — B. Numerous small vesicles are present in the perispore (Patag). — C. In the internal part of the perispore the vesicles are small ; they are bigger near its surface ; this shows some extrusions. The lens is nearly quite invaded by the internal part (mi) (Patag). — D. Reactive deposits (d) are present in epiplasmic vacuoles (v| and on the ascospore surface. The internal part of lens is important (Patag). Planche II — Abscobolus immersus, mutant albinos (géne bs). A. Détail de la paroi d'une ascospore au niveau de sa paroi intermédiaire, au-dessous d'une loupe (Patag) La mince couche de périspore qui se trouve sous la loupe est bien distincte. Une trés mince couche réactive [flèche] limite la base de la périspore à ce stade [fleche]. — B. Détail de la paroi d'une ascospore au niveau de sa paroi intermédiaire (Patag). En dehors de la loupe la couche blanche (bl) est plus épaisse que sous la loupe et parait dédoublée {double flèche]. — C. Dépóts réactifs (d) dans une vacuole de l'épiplasme et au contact entre celle-ci et le cytoplasme de l'asque [Patag]. — D. Surface d'une ascospore en cours de maturation (Patag). Noter l'abondance de vésicules assez volumineuses à contenu réactif (мр). L'aspect de la surface sporale [triple flèche] suggère l'exocytose de ces vésicules Plate III — Ascobolus immersus, albino mutant (bs gene). — A. Detail of an ascospore wall at the intermediate wall level, under a lens (Patag). The thin perispore sheath under the lens is quite distinct. At this stage a very thin reactive layer (arrow) limits the perispore basis (arrow). — B. Detail of ascospore wall at its intermediate wall level (Patag). Out of the lens the white sheath (bl} is thicker than under the lens and it seems made of two parts (double arrow). — C. Reactive deposits in an epiplasmic vacuole at its contact with the ascus cytoplasm [Patag]. — D. Surface of a maturing ascospore (Patag). Note numerous well-developed vesicles with a reactive content [vp]. Exocytose of these vesi- cles is suggested by the character of ascospore surface (tripple arrow) Planche IV — Ascobolus immersus, mutant albinos (вепе bs). — A. Ascospore proche de la maturité |Patag). La zone externe de la loupe (ze] est dilatée au niveau des lambeaux de substance fondamentale (la). Sous la masse interne réactive de la loupe une mince couche claire apparait (fleche). — B. Paroi d'une ascospore proche de la maturité (Patag). La périspore contient de petites vésicules internes d'aspect clair. Le contenu d'une vési- cule externe volumineuse est différencié. — C, D. Détails de la surface d'une ascospore proche de la maturité (Patag). La surface comporte des extrusions [ex] couvertes de dépóts Source : MNHN, Paris ASCOSPORES D'ASCOBOLUS IMMERSUS 279 (a). Dans la périspore les vésicules (vp) ont un contenu différencié dont l'aspect rappelle celui des loupes. — E. Détail du sporoplasme d'une ascospore mare [Patag]. Le plasma- lemme (pl] forme de nombreuses indentations (double flèche] ; le sporoplasme périphé- rique, clair, est dépourvu d'organites ; dans les mitochondries [m], qui ont perdu leur réactivité, les crêtes sont presque effacées. Plate IV — Ascobolus immersus, albino mutant (bs gene]. — A. Ascospore nearly mature [Patag]. The external part of the lens [ze] is expanded where shreds of fundamental subs- tance (la) are present. A thin clear layer is present under the reactive internal part of the lens (arrow). — B, Wall of a nearly mature ascospore |Patag). Small clear vesicles are contented in the perispore. An external voluminous vesicle has a differenciated con- tent. — C, D. Details of the surface of a nearly mature ascospore (Patag). There are extru- sions (ex) with deposits (d) on its surface. Vesicles [vp] in the perispore have a differentiated content which looks like the lens content. — E. Detail of the sporoplasme of a mature ascospore (Patag). Numerous indentations (double arrow] are seen on the plasmalemma (pl). No organelles are present in the clear external part of the sporoplasm ; mitochon- dria are not reactive, their crests have quite dissappeared Planche V — Ascobolus immersus, mutant granuleux (géne bs]. — A. Paroi d'une jeune ascospore (Patag). Le contact entre la périspore (p) et l'épiplasme (e) est très sinueux. La paroi intermédiaire n'est pas encore distincte. B. Jeune ascospore avec une loupe (l) à la base de la périspore (Patag). La paroi intermédiaire, bien distincte, est complexe (cf. VC). — C. Détail de VB (Patag). Dans la paroi intermédiaire la zonation de la couche castor est trés apparente. — D. Développement d'une masse interne dans une loupe de la périspore d'une ascospore assez jeune (Patag). — E. Détail du sporoplasme d'une jeune ascospore (Patag) (cf. ID). — F. Loupe de la périspore d'une ascospore assez jeune (acé- tate d'uranyle, citrate de plomb]. Plate V — Ascobolus immersus, granular mutant (bs gene). — A. Wall of a young ascos- pore (Patag). The contact between the perispore (p) and the epiplasm (e) is meandered. The intermediate wall is not yet distinct. — B. Young ascospore with a lens (l) in the perispore basis (Patag). The intermediate wall is quite distinct and complex (cf. VC]. — C. Detail of VB (Patag). The castor layer is clearly underlayered. — D. An internal part is developing in a perisporal lens of a young ascospore (Patag). — E. Detail of the sporo- plasm of a young ascospore (Patag). (cf. ID). — F. Lens in the perispore of a rather young ascospore (uranyl acetate, lead citrate) Planche VI — Ascobolus immersus, mutant granuleux |gene bs], — A. Paroi d'une ascospore en cours de maturation (Patag). Dans la loupe de la périspore la masse interne (mi) est devenue très importante. Hors de la loupe la périspore contient de petites vésicules inter- nes, claires, et des vésicules externes, plus grosses, à contenu réactif, La surface sporale est irrégulière, — B. Détail du sporoplasme d’une ascospore en maturation (Patag). (cf IVE]. — C. Detail de la surface d’une ascospore (Patag). Noter les extrusions irrégul res (ex) et les dépôts réactifs |d). — D. Détail de la surface d’une ascospore (acetate d'uranyle, citrate de plomb]. Les extrusions filiformes (ex) portent des dépôts très réac- tifs disposés comme des chapelets de saucisses. — E. Détail de la périspore d'une ascos- pore (acétate d'uranyle, citrate de plomb). La périspore moyenne, claire, contient des vésicules vp) un peu opaques Plate VI — Ascobolus immersus, granular mutant [bs gene]. — A. Wall of a maturing asco- pore [Patag). The internal part [mi] of perispore lens is now very important. Out of the lens there are small internal vesicles and bigger reactive external vesicles in the peris- pore. The ascospore surface is irregular. — B. Detail of the sporoplasm of a maturing ascospore (Patag) (cf. IVE). — C. Detail of an ascospore surface (Patag). Note irregular extrusions [ex] and reactive deposits (d). — D. Detail of an ascospore surface (uranyl acetate, lead citrate). Thread-like extrusions (ex) bear very reactive deposits remending beads of saussages. — E. Detail of the perispore of an ascospore (uranyl acetate, lead citrate}. The clear median perispore contents rather dark vesicles (vp). Planche VII — Ascobolus immersus, mutant granuleux (géne bs). — A. Détail de la paroi d'une ascospore en début de pigmentation (Patag). La masse interne d'une loupe de la périspore contient de nombreux grains de pigment, très fins (gf) alors qu'il y en a très Source : MNHN Paris 280 L.M. MELENDEZ-HOWELL, A. BELLEMERE et J.-L. ROSSIGNOL peu dans le lambeau de substance fondamentale (la). La couche castor (cc) et la couche pollux se pigmentent aussi. La lamelle noire (In) е bien réactive sous la loupe mais n'est pas distincte ailleurs (flèche). В. Détail du bord d'une loupe de la périspore d'une ascospore en cours de pigmentation (Patag). Dans la masse interne de la loupe les fins grains de pigment sont portés par des granules (gr) coalescents en une croüte vers la périphérie. Le lambeau de substance fondamentale de la loupe (la) contient de nombreux grains fins de pigment qui sont dispersés. La couche castor (cc) est bien pigmentée Plate VII — Ascobolus immersus, granular mutant (bs gene). — A. Detail of the ascospore wall in an early stage of pigmentation (Patag). The internal part of a perispore lens con- tents many pigmented, very thin granules (gf) ; those are rather scarce in the shread of fundamental substance (la). Castor layer (cc) and pollux layer are also pigmented. The black sheath (In) well reactive under the lens is not elsewhere distinct (arrow). — B. Detail of the border of a perispore lens in a pigmenting ascospore (Patag). The thin pigmented granules of the internal part of a lens are born on big granules (gr) which at the peri- phery, are fusing in a crust. In the shread of fundamental substance of the lens (la) there are numerous scattered thin pigmented granules, The castor layer (cc) is well pigmented. Planche VIII — Ascobolus immersus, mutant granuleux [gene bs). — A. Détail d'une loupe de la périspore d'une ascospore en cours de pigmentation (acétate d'uranyle, citrate de plomb). La technique de contraste ne fait apparaitre que de courts bâtonnets de pigment à la périphérie de la masse interne de la loupe. — B. Détail de la périspore surmontant une loupe dans une ascospore en cours de pigmentation [Patag). Une vésicule volumi- neuse de la périspore [vp] contient des granules de pigment (gr). Dans la loupe la zone externe n'est pas pigmentée ; la masse interne montre des grains trés fins portés par des granules qui, à la périphérie, sont associés en une sorte de croûte [cr]. — C. Périspore avec loupe dans une ascospore mare (Patag). Dans la masse interne de la loupe le pig- ment forme des cannelures (ca] trés réactives ; celles-ci font défaut dans sa partie cen- trale (pc). Dans le lambeau de substance fondamentale (la) le pigment forme des granules (gr) ou des bátonnets (b). La périspore elle-méme n'est pas pigmentée, sa surface externe est très irrégulière. — D. Détail de VIIIC (Patag) : contact entre les cannelures de pig- ment [ca] de la masse interne de la loupe et les bâtonnets (b) et les granules (gr) de pig- ment d'un lambeau de substance fondamentale (la) de la loupe Plate VIII — Ascobolus immersus, granular mutant (bs gene). — A. Detail of a perispore lens in a pigmenting ascopore (uranyl acetate, lead citrate]. Only short rods of pigment appeared contrasted in the periphery of the internal part of the lens. — B. Detail of the perispore over a lens in a pigmenting ascospore (Patag]. The perispore shows a big vesicle (vp} with pigmented granules (gr). The external part of the lens is unpigmented ; in the inter- nal part very thin granules are born on bigger granules which at the periphery are fused in a sort of crust (cr]. — C. Perispore with lens in a mature ascospore (Patag). In the internal part of the lens the pigment is disposed in reactive flutings (ca) ; these lack in the central part (pe). In the shread of fundamental substance the pigment is disposed either in granules (gr) or rodlets (b). The perispore is not pigmented ; its external surface is very irregular. — D. Detail of VIIIC (Patag) : contact between the pigmented flutings (ca) of the internal part of the lens with the rodlets (b) and the granules of pigment per- taining to a shread of fundamental substance of the lens (la) Source : MNHN, Paris PLANCHE I 281 «or er аана as Source - MNHN Paris 282 PLANCHE II Source : MNHN, Paris PLANCHE III 283 Source : MNHN, Paris 284 PLANCHE IV Source : MNHN. Paris PLANCHE V 285 Source : MNHN, Paris 486 PLANCHE VI Source : MNHN. Paris PLANCHE VII 287 Source : MNHN. Paris 288 PLANCHE VIII Source : MNHN, Paris Cryptogamie, Mycol. 1987, 8 (4) : 289-313 289 CONTROLE MORPHOGENETIQUE DE LA DIFFERENCIATION DES SCLEROTES DE SCLEROTINIA FRUCTIGENA : II - ÉTUDES CYTOLOGIQUES ET ULTRASTRUCTURALES par L. NAJIM* RÉSUMÉ — Le « shift-down » de température permet de suivre aisément le développement de tous les stades de différenciation des sclérotes, des primordia à la maturation, facilitant ainsi des études cytologi: ques et ultrastructurales sur les primordi: Les primordia de sclérotes du Sclerotinia fructigena montrent un développement important des hyphes intra-hyphales, une mélanisation des hyphes principales et des transformations ultrastructurales de quel- ques organites, particulièrement le système vacuolaire, les microcorpuscules (s microbodies »), les noyaux le reticulum endoplasmique, les accumulations fibrillaires et les mitochondries. Cette réorganisation structurale durant la différenciation des primordia va dans le sens d'une recher- che d'un nouvel équilibre physiologique, c'est-à-dire, d'un état de croissance active représenté par l'hyphe végétative vers un état de vie au ralenti : le sclérote. SUMMARY - The shift-down of temperature permits to follow easily the development and differentia tion of all states of sclerotia : from primordia to a maturation and facilitates cytological and ultrastructu- ral studies. Sclerotial primordia of Sclerotinia fructigena show an important development of intra-hyphal hyphae a melanization of principal hyphae and ultrastructural transformations of some organels, particularly vacuolary system, microbodies, nuclei, endoplasmic reticulum, fibrillar accumulations and mitochondria This structural reorganization during primordia differentiation are in the way of a research of a novel equilibrium : that is to say from one state with a high level of rate growth represented by the vegetative hyphae to a state of slow rate of growth : the sclerotia MOTS CLES : Sclerotinia fructigena, sclérote, primordia, hyphes principales, hyphes intra-hyphales, équi libre physiologique, mélanines * Laboratoire de Cryptogamie, Faculté des Sciences de Rabat, avenue Ibn Babota, B.P. 1014, Rabat - MAROC Source : MNHN Paris 290 L. NAJIM INTRODUCTION La morphogenése et le développement des sclérotes ont été étudiés par divers auteurs (WILLETTS, 1968a-b, 1969, 1972 ; CHET & HENIS, 1975) Sur le plan morphogénétique, les sclérotes sont formés de deux parties : le cor- tex et la médulla. Le cortex est feutré et plus ou moins hyalin, il entoure la médulla qui est constituée d'un ensemble d'hyphes agglutinées les unes contre les autres et qui sont riches en substances nutritives (WILLETTS, 1972, 1978). En général, leur développement se déroule en trois étapes successives : une étape d'initiation qui consiste en une différenciation des primordia, suivie d'une étape caractérisée par un accroissement de la taille et enfin une étape de maturation oü l'on distingue nettement le cortex de la médulla. Les différentes étapes sont conditionnées par les facteurs trophiques et physi- ques qui jouent un rôle déterminant dans le contrôle de la différenciation des sclé- rotes. Cette différenciation s'accompagne de changements physiologiques et cytologiques importants, car ils marquent le passage à la vie au ralenti. Dans les conditions de croissance normales, les sclérotes de Sclerotinia fructi- gena commencent leur différenciation à la fin de la conidiogenèse, et plus parti- culièrement de la macroconidiogenèse. En effet, dans les conditions naturelles, la fin de l'étape de la macroconidiogenèse constitue le point de départ de la diffé- renciation des sclérotes. Toutefois, l'étape de la macroconidiogenèse n'est pas nécessairement obligatoire, car avec le systéme de transfert (NAJIM, 1987) on peut induire une différencia- tion absolue de sclérotes en utilisant seulement les facteurs physiques comme stimuli. Les données sur la différenciation des sclérotes étant acquises, nous les avons utilisées dans un double but ; d'une part pour étudier les changements morpholo- giques et cytologiques qui accompagnent la différenciation des sclérotes tout en les comparant parallèlement avec les structures déjà observées de l'hyphe végé- tative (NAJIM & TURIAN, 1979a) et de l'hyphe conidiogène (NAJIM & TURIAN, 1979b). Ce travail permettra de mieux comprendre les phénomènes de passage d'un état de croissance active à un état de vie au ralenti, qui peut durer plusieurs années. MATERIEL ET METHODES Souches et méthodes culturales La souche de Sclerotinia fructigena utilisée a été déjà décrite (NAJIM, 1987). Tou- tefois, l'induction des primordia a été suivie sur des cultures ayant poussé pen- dant 7 jours à l'obscurité à 23°C, puis transférées durant 48 ou 96 h à 3°C. Microscopie électronique à balayage Le matériel fongique est fixé selon la méthode décrite pour l'étude de l'ultras- tructure de l'hyphe végétative du S. fructigena (NAJIM & TURIAN, 1979a). Tou- tefois, après la déshydratation à l'acétone (25, 50, 75 et 100%), les sclérotes sont sectionnés puis montés directement sur un porte-objet et couverts par une fine pellicule d'or pour assurer la conductivité. Source : MNHN Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 291 Microscopie électronique a transmission Des primordia de sclérotes, dont les stades de développement sont déterminés au microscope optique, sont prélevés et fixés pour la microscopie électronique 4 transmission. Les primordia sont fixés de la méme facon que les hyphes végétatives ; toute- fois, la durée de fixation est étendue à 2 h pour la glutaraldéhyde à 296, et 2 h pour le tétroxyde d'osmium a 2% en raison de la forte agglutination des hyphes Le matériel est déshydraté à l'alcool (25, 50,75 et 100%) et enrobé dans du SPURR (1969) Les coupes subissent successivement une double coloration d'abord à l'acétate d'uranyle à 2% en solution aqueuse et puis au citrate de plomb selon la méthode de REYNOLDS (1963). RESULTATS Morphogenése et différenciation des sclérotes Une vue d'ensemble d'un sclérote de 4 mm, sectionné transversalement per- met de distinguer le cortex et une zone centrale compacte, la médulla [Fig. 1). Le cortex est constitué de plusieurs zones plus ou moins distinctes ; on y distin- gue une évolution structurale de l'extérieur vers l'intérieur (Figs. 2, 3). La partie externe du cortex est feutrée et l'organisation des hyphes y est très lâche, elles se croisent et s'entrecroisent formant ainsi des alvéoles ou des méats et donnant un aspect spongieux aux cortex (Fig. 2). La partie interne du cortex est constituée de cordons qui sont formés de trois ou quatre hyphes accolées longitudinalement (Fig. 3). Les cordons s'enchevêtrent également dans un sens ou dans un autre. Il n'existe pas de forme structurale particulière permettant de distinguer le cortex de la médulla : toutefois, les hyphes s'organisent dans cette limite en un pro- senchyme (Fig. 4). Par contre, les sclérotes, qui se développent dans le substra- tum, différencient un cortex réduit avec des hyphes aplaties qui s'entrecroisent et qui sont mélanisées (Fig. 5). La médulla forme la partie centrale du sclérote, dont les hyphes sont mélani- sées et struccurées en un pseudoparenchyme (Fig. 4). Ces hyphes sont par ailleurs fortement liées entre elles par un ciment inter-hyphal. Différenciation des primordia de sclérotes Aprés 48 h de transfert des cultures végétatives a 3°C, les primordia commen- cent leur différenciation, ces derniers forment en premier le cortex (Fig. 6). Ces hyphes se croisent à plusieurs endroits, et sécrétent des mucopolysaccharides sous forme de fibrilles. Ces fibrilles maintiennent les hyphes reliées entre elles (Fig. 6). En outre, un certain nombre de transformations sont notées dans ces hyphes : une augmentation de la ramification (Fig. 7a), un épaississement de la paroi (Fig. 7b) et une mélanisation qui peut aussi toucher le cytoplasme (Fig. 7a,b). Après 4 jours de transfert à 3°C, les organites des hyphes situées dans la zone intermédiaire entre le cortex et la médulla se remplissent d'un ciment en appa- rence formé de mélanines. Ces hyphes mélanisées et limitrophes à la médulla for- ment la barrière protectrice de cette dernière. Source : MNHN, Paris 292 L. NAJIM La médulla des primordia de sclérotes se différencie progressivement, les hyphes s'accolent à l'aide du ciment inter-hyphal sécrété par ces dernières et les parois s épaississent fortement (Fig. 8). Par ailleurs, de nombreuses hyphes intra-hyphales sont localisées dans la médulla des primordia. Les structures des hyphes intra- hyphales sont en général préservées, alors que celles des hyphes principales sont entiérement colmatées par une substance opaque (Figs. 8-13]. Ultrastructure des organites et des différentes formations Le système vacuolaire — Le système vacuolaire se développe dans les hyphes du cortex et dans celles de la médulla, il est formé de petites vacuoles à contenu très dense aux électrons de diamètre variable entre 1 et 2 um (Figs. 10-12), et de vacuoles plus larges et à contenu moins dense aux électrons (Figs. 25-26). Dans le cas général, l'origine du système vacuolaire est lié au système réticulai le cas du S. fructigena, il apparaît que la membrane nucléaire participe à tion des vacuoles (Figs. 22, 24). labora- En effet, certaines vacuoles d'origine nucléaire, dés les premiers stades de leur formation, peuvent séquestrer des organites (Fig. 23) et du matériel cytoplasmi- que (Figs. 16, 22, 24) et les « digérer » progressivement. Cette digestion des organites, qui va dans le sens d'une recherche d'un nouvel équilibre structurel, se fait aussi par l'intermédiaire de vacuoles autophagiques (Fig. 25). Les mitochondries sont progressivement digérées par les vacuoles autophagi- ques [Fig. 25], laissant apparaitre aprés la lyse des structures de type myélinique (Fig. 26). Les microcorpuscules (« Microbodies ») — Les microcorpuscules dans les hyphes de la médulla ont une membrane unique et une matrice dense finement granulaire, leur aspect général est tout à fait identique à ceux déjà décrits dans les hyphes végétatives, dans les macroconidies et les primordia de selerotes (NAJIM & TURIAN, 1979b ; NAJIM & al., 1979). À ce stade de différenciation, les microcorpuscules ne sont pas associés aux glo- bules lipidigues (Fig. 12) qui constituent la principale source de réserve. Les noyaux — Dès l'initiation des sclérotes, les noyaux [Figs. 8-9-13) devien- nent progressivement sphériques et contiennent un nucléole fibrillo-granulaire (Fig, 8), et quelquefois des membranes intranucléaires (NAJIM, 1982]. Dans les hyphes marginales de la médulla, le déplacement des organites continue à se faire malgré la baisse de température. En effet, les noyaux peuvent encore migrer à travers un pore septal de 0.2 à 0.3 um de diamétre (Figs. 15, 16). Les septa — Comparé à l'hyphe végétative, oü les septa ne sont pas épais, dans les sclérotes ces formations s'épaississent davantage et contiennent tout au long quelques granulations (Fig. 16), apparemment du méme type que celles décrites dans les épaississements de paroi de S. fructigena (NAJIM 1982 b,c). Reticulum endoplasmique — La chute de température fait subir au systéme endomembranaire des transformations importantes : le réticulum endoplasmique notamment s'organise d'une facon similaire à un appareil de Golgi (Figs. 17, 18). Les saccules du réticulum endoplasmique lisse s'empilent les uns sur les autres : on peut dénombrer jusqu'à 8 saccules pour cet ensemble réticulaire à la figure 17. Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 293 Les extrémités de ces saccules sont digitées à la maniére des dictyosomes (Figs. 17, 18). Sur ces microphotographies, il n'apparaît pas de différences d'épaisseur entre les deux membranes d'un méme saccule (face supérieure et face inférieure]. Accumulations fibrillaires — Des formations de microfilaments sont abon- dantes dans les primordia de sclérotes (Figs. 19, 20). Ces microfilaments ont un diamètre de 60 à 70 Â, ils sont groupés en micro-réseaux et montrent une organi- sation cristalline en coupe transversale (Fig. 20). Les mitochondries et les formations de figures myéliniques — Dans les primordia de sclérotes, les mitochondries ont une matrice moins dense aux élec- trons et présentent peu de crêtes (Fig. 9), elles sont comparables à celles des macro- conidies (NAJIM, 1979). Certaines de ces mitochrondries ont des crêtes qui se transforment en corps myéliniques (ou en « whorls ») (Figs. 14, 21). DISCUSSION La biogenése est dépendante de la masse des hyphes produites en culture et notamment des nombreuses hyphes intra-hyphales qui sont générées et qui carac- térisent la formation d'une part de la médulla et d'autre part du cortex. Les hyphes intra-hyphales ont été aussi observées chez le mutant « clock » de Neurospora (LOWRY & SUSSMAN, 1966), chez le Linderina (CHAN & STEPHEN, 1967) ow encore chez le Trichophyton (FORLEY & al., 1975) ; selon ces auteurs, ce type de développement est lié à la regénération des champignons. Cependant, ce phénomène apparait comme déterminant dans la différenciation des sclérotes. En effet, sur le plan cytologique les hyphes intra-hyphales sont pro- tégées et peuvent assurer la pérennité de ce champignon ou en quelque sorte la regénération de cette espace. Le mode de formation de ces hyphes intra-hyphales reste en partie obscure ; selon CALONGE |1968} ces derniéres se développeraient à partir des septa de S. fructigena ou encore à la suite d'anastomoses entre les dif- férentes hyphes (CALONGE, 1968 ; HOFFMAN, 1972). Nos résultats tendent aussi à confirmer ces hypothèses. Sur le plan cytologique, les hyphes intra-hyphales sont baignées dans un ciment probablement constitué de mélanines et se différencient des autres par leur paroi épaisse. L'origine de ce ciment serait probablement lié aux petites vacuoles au contenu dense aux électrons. Ce ciment peut, en effet, assurer la protection des hyphes intra-hyphales qui pourront assurer la regénération de cette espéce. La biosynthése des polysaccharides pariétaux et extra-pariétaux est fortement activée durant la différenciation des sclérotes ; elle n'est donc pas inhibée par la chute de la température. Ceci a d'ailleurs été confirmé par DARGENT & al. (1984). Le rôle des mélanines est probablement de protéger les structures qui persis- tent dans les sclérotes et leur accumulation paraît être liée à l'activation des phénol- oxydases (tyrosinases) au stade primordia de sclerotes [WONG & WILLETTS, 1974). Sur le milieu de croissance MCA, les hyphes végétatives présentent à leur apex de gros globules lipidiques fortement osmiophiles qui seraient principalement com posés d'acides gras insaturés (NAJIM & TURIAN, 19794). Par opposition, les hyphes intra-hyphales des primordia de sclérotes, formés sur le méme milieu MCA, con- tiennent des globules lipidiques dont la densité électronique est relativement fai- Source : MNHN, Paris 294 L. NAJIM | ble. On pourrait donc supposer que les globules lipidiques des sclérotes sont composés d'acides gras saturés. Dans les primordia, ces lipides semblent constituer la principale source de réserve ; toutefois, à ce stade de développement, on n'observe pas de contiguité entre les microcorpuscules je mierobodies »] et les globules lipidiques. Les micro- | corpuscules, chez le S. fructigena, deviennent proéminents dans les primordia de sclérotes (NAJIM & al., 1979) Sur le plan physiologique, CHET & HENIS (1975) ont mis en évidence un cycle glyoxylique lors de la genése des sclérotes chez le Sclerotinia rolfsii. Cependant, CHET & al. (1972) et MURAKAWA & al. (1975) notent que l'activité de la péroxy- dase chez le Sclerotinia augmente du stade primordia à la maturation. Ainsi, les microcorpuscules observés dans les primordia seraient probablement des péroxysomes du fait méme de la non contiguité avec les globules lipidiques Par contre, il n'est pas exclu que lors de la germination des sclérotes, et avec les lipides comme principale source de carbone, que l'activité glyoxylique n'appa- raisse pas. La modification structurelle touchant le réticulum endoplasmique qui s'orga- nise sous la forme d'un dictyosome est décrite pour la première fois ; cette struc- ture semble être typique aux sclérotes. Probablement qu'à ce stade de différenciation, les empilements de saccules du réticulum endoplasmique lisse doi- ven jouer un rôle dans les sécrétions et les synthèses Parallèlement, des formations de microfilaments sont observées dans les hyphes où la croissance est limitée. À l'opposé, dans les hyphes végétatives en pleine crois- sance, ces formations para-cristallines se présentent rarement. Ces formations sem- blent être dissociées dans le cytoplasme des hyphes végétatives sous la forme de microfilaments de 70 À de diamètre et ces derniers, en association avec les micro- tubules (cytoplasmiques ou nucléaires), joueraient probablement un rôle dans le déplacement des organites (Figs. 16, 17] ou dans les courants protoplasmiques. En outre, des formations de ce type s'accumulent dans les hyphes végétatives pla- cées dans des conditions limitantes pour la croissance (BECK & al., 1970 ; ALLEN & al., 1974 ; TANAKA £ MIZUGANA, 1974; OULEVEY € al., 1978) et dans cer- tains cas dans les noyaux (BECK & al., 1970 ; VAN WINKLE &al., 1971 ; ALLEN & al., 1974 ; TANAKA & MIZUNAGA, 1974). En effet, dans les hyphes végétatives en pleine croissance (MCA), on trouve peu de ces formations para-cristallines, mais des microfilaments dissociés (NAJIM & TURIAN, 1979a ; NAJIM, 1979) ; ce qui nous amène à penser que les courants protoplasmiques sont liés a la dissociation partielle de formations para-cristallines en microfilaments ; notons que ces derniers ont été identifiés comme étant de l'actine chez le Neurospora (ALLEN & SUSSMAN, 1978 ; SIKORA & MARZLOUF, 1982). Les mitochondries, dans les primordia de sclérotes, ont tendance a présenter des corps myéliniques ou « worls ». Selon BECK & GREENAWALT (1976), ces for- mations en « worls » pourraient étre constituées de phospolipides. CONCLUSION De nombreuses transformations ultrastructurales sont mises en évidence lors de la différenciation des primordia de sclérotes : Source : MNHN. Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 295 — la paroi des hyphes s'épaissit, et la synthèse pariétale n'est pas inhibée, ce qui favorise la septation et le développement des hyphes intra-hyphales ; — les parois de certaines hyphes du cortex subissent une mélanisation, cette der- niére pourrait prévenir la dessiccation des sclérotes ; — les hyphes principales contenant les hyphes intra-hyphales subissent un col- matage de leurs structures, par un ciment à forte densité électronique, ce dernier pourrait étre constitué de mélanines. Par ailleurs, le systéme endomembranaire, subit aussi des transformations : * empilement de saccules de réticulum endoplasmique ; * présence de deux types de vacuoles ; + participation de l'enveloppe nucléaire à la formation du systéme vacuolaire. Certains noyaux présentent des invaginations de membranes (NAJIM, 1982a), par contre d'autres deviennent quiescents et sphériques. Les mitochondries ont moins de crêtes, elles présentent des structures similaires aux corps myéliniques. En conclusion, toutes ces transformations montrent qu'un nouvel équilibre physiologique se crée, avec une élimination des organites en excès [activité du système vacuolaire, colmatage des hyphes principales) et la préservation d'un mini- mum de structures vivantes (restructuration du système endomembranaire, des noyaux et des hyphes intra-hyphales]. La biogenése des sclérotes peut donc se résumer comme suit : une condensa- tion de structures vivantes et une élimination de la matiére en excés par voie lytique. 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Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 297 ABREVIATIONS UTILISEES DANS LES FIGURES Cih ciment inter-hyphal Mb microcorpuscule COR cordon ME médulla co cortex N noyau F faisceau de microfilaments n nucléole g granulations P paroi H hyphe mélanisée Re réticulum endoplasmique HM automélanisation 5 septum i globule lipidique v vacuole M mitochondrie м corps de Woronin ABBREVIATIONS USED IN FIGURES Cih inter-hyphal cement Mb microbodies COR strand ME medulla co cortex N nuclei F bundle of microfilaments n nucleoli g granulations P wall H melanized hyphae Re endoplasmic reticulum HM automelanization 5 septum L lipid globule v vacuole M mitochondria w woronin body Fig. 1 — Sclérote en coupe transversale, observé au microscope électronique à balayage : on distingue le cortex (CO) et la médulla (ME) Fig. 2 — Agrandissement de la zone intermédiaire entre le cortex et la médulla. Le cortex est formé d'hyphes associées en cordons Fig. 3 — Detail des cordons (COR), espaces libres entre les cordons. 4 — Détails de la médulla : hyphes baignées dans un ciment inter-hyphal (Cih). Plu- sieurs hyphes paraissent colmatċes. Fig. 5 — Détail de la surface d'un sclérote formé dans le substratum : sclérote à cortex lisse et rċduit : hvphes colmatċes et s'entrecroisant (H). Fig. 6 — Début de différenciation de sclérote (Primordium). Hyphes qui s'entrecroisent, et accumulation de mucopolysaccharides. Fig. 7 — a. Biogenése des sclérotes : primordium. Hyphes a parois épaisses et mélanisées, accumulation du ciment inter-hyphal, ramification des hyphes. b. Large hyphe à paroi épaisse (P) et automélanisation (HM). Fig. 8 — Coupe à travers un primordium de sclérotes (après 4 jours de transfert) (même type de structures que dans la figure 7). Formation du cortex avec des hyphes fortement mélanisées (HM] dont les divers organites sont colmatés. Paroi épaisse (P), forte accumulation du ciment inter-hyphal (Cih), vacuolisation inten- sive dans les hyphes du cortex (v). Les noyaux sont sphériques (N). Forte agglutination des hyphes de la médulla et développement des hyphes intra-hyphales. Fig. 9 — Coupe longitudinale d'une hyphe de la médulla. Hyphe intra-hyphale dont la structure est préservée, contenue dans une hyphe mélanisée [HM). Paroi épaisse des deux hyphes. Fig. 10 — Coupe d'une hyphe du cortex. Plusieurs vacuoles à contenu très dense aux élec- trons [v]. Cytoplasme riche en polysomes. Paroi épaisse avec une forte accumulation du ciment inter-hyphal (Cih) Source : MNHN. Paris 298 L. NAJIM Fig. 11 — Coupe transversale d'une hyphe de la médulla. Hyphe intra-hyphale avec des globules lipidiques, des mitochondries (MJ et des vacuoles {v}. Structures entièrement mélanisées de l'hyphe principale [HM]. Paroi épaisse des deux hyphes (P) Fig. 12 — Détail de la structure d'une hyphe intra-hyphale. Nombreux globules lipidiques [L], vacuoles à contenu dense aux électrons [v], mitochondries (M), microcorpuscules (Mb] au voisinage des mitochondries et de nombreux polysomes. Fig. 13 — Coupe transversale d'une hyphe de la médulla. Hyphe intra-hyphale, avec un noyau (N) et un microcorpuscule (Mb), comprimant les structures entiérement mélanisées de l'hyphe principale où subsistent encore des globules lipidiques. Fig. 14 — Hyphe intra-hyphale avec des mitochondries montrant des figures myéliniques (flèche) Fig. 15 — Coupe longitudinale d'une hyphe de la médulla, Nombreux noyaux dans cette hyphe [N]. Noyau passant à travers un pore septal. Les fléches montrent les « pressions » que peut avoir subi le noyau et donc le sens de déplacement de ce dernier. Microcorpus- cule fortement développé (Mb), saccules du réticulum endoplasmisque empilés (Re), fais- ceau de microfilaments en coupe transversale (Е), granulations (g) observées le long du septum épais [S] Fig. 16 — Détail de la figure 15. Pression exercée sur le noyau montrant dans quel sens le noyau se déplace (double flèche]. Fig. 17 — Empilement de saccules de réticulum endoplasmique lisse. Saccules du réticu- lum, fenestrés à leurs extrémités (fléche) Fig. 18 — Huit saccules du réticulum endoplasmique (Re) empilés les uns sur les autres à la maniére d'un appareil de Golgi. Fig. 19 — Accumulations fibrillaires : coupe longitudinale au niveau d'un faisceau de microfilaments formant un véritable réseau [F]. Fig. 20 — Coupe transversale montrant l’organisation pseudo-cristalline des microfila- ments (F). Fig, 21 — Corps myélinique (« worls ») intra-mitochondrial (M) Fig. 22 — Système vacuolaire [v) se formant à partir de l'enveloppe nucléaire (N). Fig. 23 — Mitochondrie séquestrée par l'enveloppe nucléaire. Fig. 24 — Vacuole autophagique développée par l'enveloppe nucléaire (double flèche). La lumière de la vacuole est légèrement transparente aux électrons (v) Fig. 25 — Mitochondrie digérée par une vacuole autophagique (double fléche) Fig. 26 — Vacuole autophagique a un stade avancé, avec des dépóts denses aux électrons et un corps myélinique Fig. 1 — Transversal section of sclerotia, observed with scanning electron microscope. Cor- tex (CO) and medulla (ME) are clearly seen Fig. 2 — High magnification of the jonction zone between cortex and medulla. Cortex is constitued by strands of hyphae. Fig. 3 — Detail of strands (COR), empty spaces between strands Fig. 4 — Detail of medulla : hyphae are plunged in an inter-hyphal cement (Cih). Several hyphae appear to be cloged. Fig. 5— Sclerotia formed in the substratum. Detail of sclerotia surface, the cortex is smooth and reduced in thickness ; hyphae are cloged and cross one another (H). Fig. 6 — First state of sclerotia differentiation (primordium}. Hyphae that intersect and accumulation of mucopolysaccharides. Source : MNHN. Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 299 Fig. 7— a. Sclerotia biogenesis : primordium. Hyphae with thick and melanized walls. Accu- mulation of inter-hyphal cement, ramification of hyphae. b. Large hyphae with thick walls (Р). Automelanization of hyphae (HM) Fig. 8 — Section throught a sclerotium primordia (4 days of shift-down ; same struc- tures as in figure 7). Cortex formation : highly melanized hyphae (HM) with cloged orga- nelles. Thick wall (P) ; accumulation of inter-hyphal cement (Cih) ; intensive vacuoliza- tion of cortex hyphae {v}. Nuclei are spherical (N). High agglutination of medulla and formation of intra-hyphal hyphae. Fig. 9 — Longitudinal section of medulla hyphae. Intra-hyphal hyphae where all the structures are preserved and included in a melanized hyphae (HM) ; thick walls of the two hyphae {P} Fig. 10 — Section of cortex hyphae. Several vacuoles with electron dense material inside (v). The cytoplasm contains several polysomes. Thick wall and accumulation of inter-hyphal cement (Cih] Fig. 11 — Transversal section of medulla hyphae. Intra-hyphal hyphae with lipid globules and mitochondria (M) and vacuoles (v). Principal hyphae (HM) where all structures are melanized. Thick walls of both hyphae. Fig. 12 — Ultrastructure of intra-hyphal hyphae. Numerous lipid globules (L), vacuoles with electron dense content [v], mitochondria (M), microbodies (Mb) near mitochondria and numerous polysomes. Fig. 13 — Transversal section of medulla hyphae. Intra-hyphal hyphae with nucleus (N) and microbody (Mb) compressing the melanized structure of the principal hyphae where subsist some lipid globules. Fig. 14 — Intra-hyphal hyphae with mitochondria showing myelin figures inside (arrow) Fig. 15 — Longitudinal section of medulla hyphae. Numerous nuclei (N) in this hyphae Nucleus passing through the septal pore. Arrows show the pressions to which the nucleus is submitted and the removal direction of this later. Large microbody (Mb). Flattened cisterna of endoplasmic reticulum stacked (Re) ; transversal section of microfilament bundle (F], granulations (g) in a thick septum (5). Fig. 16 — Detail of figure 15, showing the thick septum and the nucleus passing through the septal pore and the direction of removal (double arrow). Fig. 17 — Cisterna of smooth endoplasmic reticulum. Cisterna fenestrated at the extre- mities (arrow). Fig. 18 — Eight cisterna of endoplasmic reticulum [Re] stacked. Cisterna fenestrated as a Golgi apparatus. Fig. 19 — Fibrillar accumulations : longitudinal section through bundle of filaments (Е) Fig, 20 — Transversal section of bundle showing pseudo-cristalline organization of micro- filaments. Fig. 21 — Myelin figures (« Whorls ») inside mitochondria (M). Fig. 22 — Formation of vacuolar system from the endomembranes : nuclear mem- brane (N) Fig. 23 — Mitochondria sequestrated by nuclear envelope. Fig. 24 — Autophagic vacuole (v) in contact with nuclear envelope (double arrow] Fig. 25 — Mitochondria digested by an autophagic vacuole (double arrow). Fig. 26 — Advanced stage of autophagic vacuole with electron dense deposit and myelin figures. Source : MNHN. Paris 300 L. NAJIM Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 301 Source : MNHN, Paris 302 L. NAJIM Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 303 Source : MNHN, Paris 304 L. NAJIM Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 305 Source : MNHN. Paris 306 L. NAJIM Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 307 Source : MNHN. Paris 308 L. NAJIM Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 309 Source : MNHN, Paris 310 L. NAJIM Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 311 Source : MNHN, Paris L. NAJIM 312 Source : MNHN, Paris SCLEROTINIA FRUCTIGENA 313 Source : MNHN, Paris Source : MNHN. Paris Cryptogamie, Mycol. 1987, 8 (4) : 315-320 315 THERMOPHILIC AND THERMOTOLERANT FUNGI ASSOCIATED WITH SEEDS OF FIVE MEMBERS OF UMBELLIFERAE FROM EGYPT by ALL ABDEL-HAFEZ*, A.M.M. MOHARRAM** and A.Y ABDEL-MALLEK** SUMMARY — Eighteen thermophilic and thermotolerant species in addition to 2 varieties belonging to 13 genera were isolated from seeds of caraway (11 genera and 15 species}, cummin (10 genera and 15 species), fennel (9 genera and 12 species), anise (8 genera and 11 species) and coriander (7 genera and 10 species) on glucose-Czapek's agar at 45°C. Total counts of thermophilic and thermotolerant fungi fluc- tuated according to the samples tested between 24-432, 30-496, 8-1000, 12-572 and 30-520 colonies per g dry seeds in the five types of seeds, respectively. Aspergillus fumigatus, Emericella nidulans and Rhizo- mucor pusillus were the most prevalent fungi in all types of seeds. Truly thermophilic fungi were isola- ted, but with variable densities and frequencies, from the various types of seeds and these were Chaetomium thermophilum var. coprophilum, Humicola hyalothermophila, H. grisea var. thermoidea, Mal: branchea pulchella var. sulfurea, Melanocarpus albomyces, Myceliophtora thermophila, Talaromyces dupontii and Thermomyces lanuginosus. RÉSUMÉ — Dix-huit espèces et 2 variétés thermophiles et thermotolérantes, appartenant à 13 genres, ont été isolées de graines de carvi (11 genres et 15 espèces), cumin (10 genres et 15 espèces), fenouil (9 genres et 12 espèces], anis (8 genres et 11 espèces) et coriandre (7 genres et 10 espèces) sur milieu Ċzapek (glucose), à 45° C. Les nombres de champignons thermophiles et thermotolérants fluctuent, res- pectivement dans les cing types de graines, entre 24-432, 30-496, 8-1000, 12-572 et 30-520 colonies par gramme de graines séches. Aspergillus fumigatus, Emericella nidulans et Rhizomucor pusillus sont les cham pignons les plus fréquents dans tous les types de graines. Des champignons thermophiles ont été isolés, mais avec des dentités et des fréquences variables, ce sont Chaetomium thermophilum var. coprophilum, Humicola hyalothermophila, H. grisea var. thermoidea, Malbranchea pulchella var. sulfurea, Melanocarpus albomyces, Myceliophtora thermophila, Talaromyces dupontii et Thermomyces lanugisosus. KEY WORDS : Seed-borne, thermophilic fungi, thermotolerent fungi, caraway, cummin, fennel, anise, coriander. * Botany Department, Faculty of Science at Sohag, Assiut University, Egypt. ** Botany Department, Faculty of Science, Assiut University, Assiut, Egypt, Source : MNHN, Paris 316 A.LI. ABDEL-HAFEZ, A.M.M. MOHARRAM and A.Y. ABDEL-MALLEK INTRODUCTION Thermophilic and thermotolerant fungi have been mostly associated with either heat-damaged or stored seeds from different places of the world (MULINGE & APINIS, 1969 ; MULINGE & CHESTERS, 1970 ; MILLS & BOLLEN, 1976 ; FLAN- NIGAN, 1969). These fungi were also isolated from stacks of oil palm kernels in Nigeria (OSO, 1974] and were found to cause serious deterioration during storage of the palm kernels (OSO, 1979) or palm produce (OGUNDERO, 1981а). In Egypt, several investigations have been carried out on the frequencies of occur- rence and densities of mesophilic seed-borne fungi (MOUBASHER & al., 1972, 1979, 1980, 1983 and others), but only that of MOUBASHER & al. (1979) and ABDEL-HAFEZ & SHOREIT (1986) dealt with thermophilic fungi associated with peanut, bean, lupine, and pea seeds. The present investigation aimed to study the densities and frequencies of occurrence of these fungi associated with seeds of five medicinal plants of the family Umbelliferae commonly used and cultivated in Egypt for their nutritive and medicinal values. MATERIALS AND METHODS Forty samples of each of caraway (Carum carvi L.), cummin (Cuminum cyminum L.), fennel (Foeniculum vulgare Miller], anise [Pimpinella anisum L.) and coriander (Coriandrum sativum L.) seeds of crop 1986, of 250 g each, were collected from the market in eight Governorates from Egypt namely, Cairo, Giza, Beni-suef, El- Minya, Assiut, Sohag, Qena and Aswan. The number of samples from each gover- norate and seed type was five. Determination of thermophilic (or thermotolerant) seed-borne fungi : The dilution-plate method was used as employed by MOUBASHER & al. (1972). Czapek's agar medium was used in which glucose (10 g/l) replaced sucrose. Rose bengal (66 ppm) was added as a bacteriostatic agent (SMITH & DAWSON, 1944). Five plates were used for each sample and were incubated at 45°C for 7-10 days and the developing fungi were counted, identified and calculated per g dry seeds. RESULTS AND DISCUSSION Total counts of thermophilic and thermotolerant fungi were considerably high (Table 1) and anise seeds were the richest in total fungal population (8 700 colonies рег g seeds in forty samples) followed by cummin (7 370 colonies), fennel (7 320 colonies), coriander (5 340 colonies) and caraway seeds (5 020 colonies) Total counts of these fungi ranged between 12-572, 30-496, 8-1000, 30-520, and 24-432 colonies per g dry seeds, respectively. ABDEL-HAFEZ & SHOREIT (1986) found that total counts of thermophilic and thermotolerant fungi were generally low in pea (193.2 colonies), bean (79.8 colonies) and lupine seeds (46.2 colonies per g in all samples ; 30 samples each) collected from eight Governorates in Upper Egypt. Thirteen genera and eighteen species in addition to one variety of each of E. nidu- lans and A. fumigatus were identified on the whole. Broadest spectra of genera and species was recorded in caraway (11 genera and 15 species} followed by cum- min (10 genera and 15 species), fennel (9 genera and 12 species), anise (8 genera and 11 species) and coriander seeds (7 genera and 10 species). Source : MNHN. Paris 317 THERMOPHILIC AND THERMOTOLERANT SEED-BORNE FUNGI Desh B (asoon18) sodezo naqrur ans |[mou>} 'uJuIno “91pueLio) ‘tA1e9 ‘stue) sauteaß ор зэА с әр дей e sapos! suouBidureyo ap 522459 12 591190 — т пеЧе, SOSEJ g Чецу 592] ‘291211520 эле ! ввв9 6-а WON "здиаипазо Moy : зовво T-HT WO1 "зоизпаго ауозарош ! ѕәѕвә 09-02 чәәмцә4 "2002: .n200 ЕН "Оабр те деве 5.424220 — 93018 по раза} ajdures AroAo ut рицар рив шишшпо пориеноз ‘Kemexed ‘astue Jo yoga jo spaas (ар 3 14 рауеунътва [DJ] sumo? [ero ray pus sorods pue ezouos [eSunj jo (ПОМ) Sajdures Op JO no 'uonejost jo soseo jo susquimN — TAQEL (nr Ee OS SEM) 6 294 6 89 A ESTAS A as NE L b. $ A EN CL TN go E en за: i^ LT ша "es EY cm ge, 273 сЕ So маса Eg а в №3 RA CNT NE CE gl zee gt 08 и 80L ZŁ bol bl 06! 6l ol 02 зы 22 OSE Ш 04 9 288 S g ES c k aaa A = 2 = = T D Cameco ра EZ Sm C ео ра E IA ve 9 tb 101 2227 в Ш cz #1 9 9 в в 0 И 9 ее 00 06 02 вог £2 088 2 59 2| 86 DE 062 22 822 Ob 0067 0 2985 6t 0LLb Op 2986 GE 2051 0ZEL oles oves 0208 0048 uuny Laok 911235 ANSULYLS] SnSOLIÓNUD] заойшошаәцг oue|qnew 9 U0Jjl49 222u0dnp seofuoapn], XAy*A (UosJauj 9 À3U00)) eeehuogry зплрооиотен 40425200 (sturdy) 27зидошлаца vaoaydor120hy ULT (044: * LILNA) umuzadeosfzzo uniMopodas uossaug 9 әио0) шту2мйолӣоо "аел шитзудошлэца шпршозорцо zajeH-Lapqy 9 ueze *әцѕедпои от 24йошагутотрйц руоозшин uosaawg Каиоод рарзошяецз “дел 229348 вроозиин Jaupeg 22302400 вәойшотзоәра 1054913 Kauoo) (aualW) vaunfans "den 2712цот4 роцоиочтен “ds coon 49441425 (зрирт) епатавпд аоопшоваци шаубоц шед а2би впо7аблодву Lemeuby $ плен ‘Ley angzo ‘en engpdrumf впотаваодву шщшггиев (uadey 9 woul) овогибна гъггоълаща utwefuag (чойен 8 шоц.) D3Dou272aponb D7700340ug ade $ Uou] engp “ARA SUDINPIU D7790740Ug шоці злэдаәз в7712642аву “LLENA (шеруз) еиртпрзи о722озл9ия snyuasaug angoögumf anzı7Brodey gunos e301 TON 2L ION 3L том 21 , ION IL IN IL Lauuad utuung — dapuetsog емлеу ET 5912945 рие euauag Source : MNHN, Paris 318 A.LI. ABDEL-HAFEZ, A.M.M. MOHARRAM and A.Y. ABDEL-MALLEK Aspergillus fumigatus and E. nidulans were the most prevalent fungi. They emer- ged in 97.5% and 55%, 100% and 75%, 97.5% and 30%, 100% and 80%, and 100% and 57.5% of the samples contributing 86.5% and 2.6%, 76.9% and 5.8%, 89.3% and 1.1%, 72.8% and 10.4%, and 67.9% and 12% of total fungi, respecti- vely. Reports from Malaysia showed that A. fumigatus was also the most frequent species on freshly harvested rice seeds (KUTHUBUTHEEN, 1979). A. terreus reco- vered in high frequency of occurrence (50% of the samples) from anise and cara- way seeds, retreated to a backward situation in the other three seed types (15%, 30% and 22.2% of the samples). E. nidulans var. latus also isolated in moderate frequency of occurrence from caraway (30% of the samples) and cummin (25%) seeds, was of low or rare frequency in the other seed types (12.5%, 7.5% and 15% of the samples). The preceding species were also observed, but with varia- ble densities and frequencies, from Egyptian peanuts, bean, lupine and pea seeds (ABDEL-HAFEZ & SHOREIT, 1986 ; MOUBASHER & al., 1979), as well as from Nigerian palm produce (OGUNDERO, 19814]. E. quadrilineata, A. fumigatus var albus, E. rugulosa and A. niger were less common on all seeds. Rhizomucor pusillus was also common on most types of seeds comprising 65%, 42.5%, 55%, 50%, and 47.5% of the samples, respectively. This species was pre- viously encountered, but with variable densities and frequencies, from Egyptian soils, some types of seeds and self-heating materials (MOUBASHER & al., 1979, 1982), as well as from freshly harvested rice seeds from Malaysia (KUTHUBU- THEEN, 1979). Paecilomyces variotii, moderately encountered from caraway seeds (25.0% of the samples), was less frequent on the remainder types of seeds (5-12.5 %). MOUBAS- HER & al. (1979) isolated P. variotii in rare frequency of occurence (5% of the samples) from peanut seeds under the same experimental conditions. Truly thermophiles such as Malbranchea pulchella var. sulfurea, Humicola grisea var. thermoidea, H. hyalothermophila, Thermomyces lanuginosus, Chaetomium ther- mophilum var. coprophilum, Myceliophtora thermophila, Melanocarpus albomyces and Talaromvces dupontii occured in reduced frequencies on one or several types of seeds tested (Table 1). MOUBASHER & al. (1982) found that the majority of these thermophiles were active colonizers of wheat and broad-bean straw composts. They also reported that wheat and broad-bean straws lost nearly half of their dry weight after 60 days of composting ; this loss was mainly attributed to the acti- vity of thermophilic fungi. The remaining genera and species isolated (Table 1] were less frequent. Most of these fungi were reported from strored moist barley grains (MULINGE & APINIS, 1969), peanut (MOUBASHER & al., 1979], some leguminous seeds (ABDEL-HAFEZ & SHOREIT, 1986) and from different types of dates in Aswan area (NASSAR, 1986). T. lanuginosus was one of the most fre- quent species on freshly harvested rice seeds from Malaysia (K UTHUBUTHEEN, 1979), as well as from Nigerian palm produce (OGUNDERO, 1981a). FLANNI- GAN & SELLARS (1972) found that A. fumigatus, A. nidulans (= E. nidulans), A. ter- reus, M. pusillus (= Rh. pusillus) and T. lanuginosus strains recovered from barley kernels were able to degrade arabinoxylan and carboxymethyl cellulose. They also reported (in 1977) that A. fumigatus, M. pusillus (= Rh. pusillus) and T. lanuginosus produced amylase, 8-glucosidase and 8-xylosidase. SELLARS & al. (1976) indica- ted that A. fumigatus could degrade barley husk and produce 1,4 8-glucanase and £-glucosidase when grown on eigher barley husk or crystalline cellulose. Ther- mophilic fungi were found to cause serious deterioration during storage of palm kernels (OSO, 1979), a considerable decrease in the oil contents of the palm fruit chaffs and the palm kernels by C. thermophilum, T. lanuginosus and Torula ther- Source : MNHN, Paris THERMOPHILIC AND THERMOTOLERANT SEED-BORNE FUNGI 319 mophila (OGUNDERO, 1981b}. Occurrence of these thermophilic or thermotole- rant fungi in addition to mesophiles on the seeds of different plants which are grown in Egypt for their nutritive or medicinal values, calls for cautions handling during transport, storage and processing since numerous of these fungi were repor- ted to be pathogenic to man and farm animals (COONEY & EMERSON, 1964 and LACEY, 1975) ACKNOWLEDGEMENT ‘The authors are deeply indebted to Prof, Dr. 5.1.1. ABDEL-HAFEZ (Bot, Dept., Faculty of Science, Assiut University} for valuable help REFERENCES ABDEL-HABEZ A.L.1. and SHOREIT A.A., 1986 — Mycoflora of bean, lupine and pea seeds in Egypt. Aswan Sci. Techn. Bull. 7: 127-142, COONEY D.G. and EMERSON R., 1964 — Thermophilic fungi, Eumycota. San Francisco, W.H. Freeman Publ. Co. FLANNIGAN B., 1969 — Microflora of dried barley grain. Trans. Brit. Mycol. Soc. 53 : 371-379. FLANNIGAN В. and SELLARS P.N., 1972 — Activities of thermophilous fungi from barley kernels against arabinoxylan and carboxymethyl cellulose. Trans. Brit. Mycol. Soc. 58 : 333-341 FLANNIGAN B. and SELLARS P.N., 1977 — Amylase, &-glucosidase and R-xylosidase activity of thermotolerant and thermophilic fungi isolated from barley. Trans. Brit. Mycol. Soc. 69 : 316-317. KUTHUBUTHEEN A J., 1979 — Thermophilous fungi associated with freshly harvested rice seeds. Trans. Brit. Mycol. Soc. 73 : 357-359. LACEY J., 1975 — Potential hazards to animal and man from microorganisms in fodders and grains. Int. Biodeterioration Bull. 12 : 37-41 MILLS J.T, and BOLLEN G.J., 1976 — Microflora of heat-damaged rapeseed. Canad. J. Bot. 54 : 2893-2902. MOUBASHER A.H., EL-NAGHY M.A. and ABDEL-HAFEZ S.LI. 1972—Studies on the fungus flora of three grains in Egyp. Mycopathol. Mycol. Appl. 47 : 261-274, MOUBASHER A.H., EL-HISSY F.T., ABDEL-HAFEZ S.1.1. and HASSAN S.K.M., 1979 — The mycoflora of peanuts in Egypt. Mycopathologia 68 : 39-46. MOUBASHER A.H., ABDEL-HAFEZ S.L.I., EL-HISSY F.T. and HASSAN S.K.M., 1980 — Effect of temperature and moisture content on Egyptian peanut seed-borne fungi. Myco- pathologia 70 : 49-54. MOUBASHER A.H., ABDEL-HAFEZ S.I.I, ABDAL-FATTAH H.M. and MOHARRAM A.M., 1982 — Fungi of wheat and broad-bean straw composts. II-Thermophilic fungi. Mycopa- thologia 78 : 169-176. MOUBASHER A.H., ABDEL-HAFEZ $.1.1. and ABDEL-KADER M.LA., 1983 — Osmophilic fungi of barley grains in Egypt. 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RÉSUMÉ - Nous proposons comme nouvelle espèce Gastrocybe iberica, qui est caractérisée par ses lames non anastomosées, sa cuticule hyméniforme avec d'abondants piléocystides et ses basides bisporiques Cette espèce a été récoltée en abondance dans des prairies hygrophytes sous Populus alba, entre des Poa ceae sp. et dans des prairies d' Hordeion leporini. RESUMEN — Se propone Gastrocybe iberica como una especie nueva para la ciencia caracterizada por sus láminas no anastomosadas, su cutícula himeniforme con abundantes pileocistidios y sus basidios bispóricos. Ha sido recogida muy abundante en praderas higrófilas de Populus alba entre Poaceae sp. y en praderas de Hordeion leporini KEY WORDS : Taxonomy, Gastrocybe, Bolbitiaceae, Basidiomycotina ‘The genus Gastrocybe was created by WATLING (1968) for a gastromycetoid fungus, G. lateritia found in America, of which WATLING &al. (1966) later exten- ded its chorology to Europe (Italy and Spain). The second species described up to date was found in North America, Gastrocybe deceptiva Baroni, and only the typus collection is known ; BARONI (1981) created this taxon based on the mate- rial collected by BARTHOLOMEW in 1896. This genus is very close to Galeropsis Velen. & Dvorak in Velen. but they both mainly differ in the structure of the cuticle which is a hymeniform pileipellis in Gastrocybe, and a cutis with filamentous hyphae in Galeropsis. 1. This paper was presented at the « VII Simposio Nacional de Botánica Criptogámica », in Madrid (23-26 september 1987). + Departement of Plant Biology Botany), University of Alcalá de Henares, Madrid. Spain Source : MNHN. Paris 322 G. MORENO, C. ILLANA and M. HEYKOOP | 1cm «d S Fig. 1-3 — Gastrocybe iberica Moreno, Ilana & Heykoop, carpophores (1-2, Holotypus n° 9 990 ; 3, n* 9 992) Source : MNHN, Paris GASTROCYBE IBERICA SP. NOV. 323 At the present time the taxonomic position of this genus is controversial. For HAWKSWORTH & al. (1983) the genus Gastrocybe and Galeropsis belong to the family Galeropsidaceae, order Podaxales of the Gasteromycetes and they would be related to the family Bolbitiaceae of the Agaricales. SINGER & PONCE DE LEÓN (1982) placed it with the genus Galeropsis in the family Galeropsidaceae and pointed out that they represent secotiaceous fungi. Later on, SINGER (1986) still denotes that both genera belong to the family Galeropsidaceae and that they can be considered as Gasteromycetes in the traditional sense. WATLING & GRE- GORY (1981) distinguished agaricoid forms and gasteroid forms in the Bolbitia- ceae and considered both genera, Galeropsis and Gastrocybe, among the gasteroid forms. WATLING & YOUNG (1983) included Gastrocybe in the Bolbitiaceae and not in the Galeropsidaceae. MOSER (1983) included the genus Galeropsis in the family Bolbitiaceae and no reference was made to Gastrocybe, possibly because it was unknown in Europe at that time. The first record of this genus in our con- tionent (Spain and Italy) is made by WATLING & al. (1986). We agree with these last authors and believe that the genus Gastrocybe, toge- ther with Galeropsis, belong to the family Bolbitiaceae, an argument based on the fact that the new described taxon has dermatocystidia, which brings it near to some species of the genus Conocybe, furthemore, it presents closed carpophores which makes it close to Galeropsi; Hypothetically, we think that it is possible that the genus Galeropsis had its ori- gin through the genus Gastrocybe. The reason for this hypothesis is that some spe- Cies of Gastrocybe are macroscopically exact to those of Galeropsis, and a microscopic study of their pellis is necessary to differentiate them. Besides, in the case of Gastrocybe iberica the hymeniform cuticle is reduced to one single layer of cells, sometimes difficult to observe under the microscope, and through the loss of this layer the genus Galeropsis could have been originated The microphotographs were made under a Nikon microscope model Optiphot with an incorporated system of automatic photography and "Normaski'' interfe- rence contrast. The material examined has been kept in the herbarium of the Departement of Plant Biology (Botany) of the University of Alcalá de Henares and the numeration is indicated for any consultation or revision Gastrocybe iberica Moreno, Ilana & Heykoop, sp. nov., Fig. 1-16 Etymology : from latin iberica, relating to the place where this fungus was col- lected. Pileus [0,6], 0,8 - 2,2 (2,5) cm longus, 0,2 - 0,4 cm latus, cylindricus, acuto apice, colori paleae simili, at cinereo in herbario, sine striis, glaber, cuius inferior pars clausam atque pedi adhaerentem se praebet. Stipes, qui fit in basi paulo amplior [1] 2 - 4 (5,5) cm longus, fere 0,1 cm est latus. Laminae sunt ascendentes, pressae, proba forma, haud anastomosantes, interdum bifur- catae in basi, ochraceo-ferrugineo colore. Lamellulae non observantur. Velum abest. Basidiosporae 15-20 (23) um longae, 9-13 (18)um sunt latae, quarum forma inter ellip- soidea et amygdaliformis, ochraceo colore, germinativo poro praeditae. Basidia bispo- rica sunt, 18-22 um longa, 9-11 um lata. Cystidia absunt, Pileipellis hymeniformis, cellulis quarum diameter est 9-17 um longus constituta. Pileocystidia frequentissima, hyalina, lageniformia, quorum est longitudo maxima 60 um , latitudo e 15 um vergit in 6 um rursusque in 8 um. Fibulae adsunt. Source : MNHN. Paris 324 G. MORENO, C. ILLANA and M. HEYKOOP Habitat : in pratis hygrophytis (Poaceae sps., Trifolio fragiferi-Cynodontetum), basico in solo [pseudogley) populeti (Populus alba). Item in pratis [Hordeion leporini], basico in solo (rendsinas). In praedio cui nomen « La Oruga », Compluti (Matriti) 30 TVK7282, leg. Moreno, C. Illana & M. Heykoop, 9-X-86, Holotypus n° 9 990. Pileus (0.6) 0.8 - 2.2 (2.5) om high and 0.2 -0.4 cm broad, cylindrincal, acute apex, cream-straw coloured, ash-coloured when dried, not striate and glabrous, touching the stipe being narrowed and applicate below. Stipe becoming slightly broader at the base (1) 2-4 (5.5) cm high and aproximately 0.1 cm broad. Lamellae ascendant, narrow, well formed, not anastomosing but sometimes forked at the base, ochraceous-ferrugineous. Lamellulae not observed. Veil absent. Basidiospores 15-20 (23) x 9-13 (18) um, variable in shape, ellipsoid-amygdaliform, ochraceous with germ pore not clearly visible under the optical microscope but very clear with « Nomarski » optics, and with hilar appendage. Basidia bisporic, 18-22 x 9-11 um, sterigmata long, up to 7 um in length. Cystidia not observed. Pilei- pellis hymeniform, formed by clavate to pyriform or subglobose cells, 9-17 um in diameter. Pileocystidia very abundant, hyalines, lageniform at the base with a long cylindrical neck to subcapitate, up to 60x 15x 6x 8 um. Clamp connections present. Habitat : In hygrophytic meadow (Poaceae sp., Trifolio fragiferi-Cynodontetum), basic soil [pseudogley) from poplar grove (Populus alba). And in meadows of Hor- deion leporini, basic soil (rendsinas). Material examined : Finca La Oruga, Alcalá de Henares (Madrid) 30TVK7282 leg. C. Moreno, C. Illana & M. Heykoop, 9-X-86, Holotypus n? 9 990 ; ibidem leg. C. Illana, 11-X-86, n* 9 991 ; climbing from the Finca La Oruga to the hill Ecce-Homo, Alcala de Henares (Madrid), 30TVK7281, leg. C. Illana, E. Illana & J. Chico, 2-XI-86, n? 9 993 ; Los Catalanes, Alcalá de Henares (Madrid) 30TVK7081, leg. C. Illana, I. López & P. Sánchez, 2-XI-86, n^ 9 992 ; Tabla Pintora, Alcalá de Henares (Madrid) 30TVK6979, leg. C. Illana & M. Heykoop, 9-X1-86, n° 9.994 Isotypus in the herbarium of Dr. R. Watling in Edimburg (E) and in the herba- rium of the Royal Botanical Garden of Madrid (MA-fungi). Comments : Gastrocybe iberica is characterized by its non-deliquescent cylin- drical pileus with acute apex and with the lower part closed and applicate to the stipe. The gills are not anastomosed. It shows very abundant dermatocystidia in the cuticle ; it has no pleurocystidia ; the basidia are bisporic and the spores have a clear germ pore well visible with « Nomarski » interference contrast. Gastrocybe lateritia Watling is different because of its quickly deliquescent carpophores with an open and cylindrical-campanulate to conical-campanulate pileus. Moreover, it presents lecythiform cheilocystidia and tetrasporic basidia. Gastrocybe decep- tiva Baroni |= Bolbitius tener Berk. var. incarnata Peck}, only known from North America (BARONI, 1981), is different from G. iberica because of the colour of its carpophores and the intervenose gills. Besides it lacks pileocystidia. The by BARONI (1981) observed and sketched cheilo- and pleurocystidia have not been observed in G. iberica. If we compare G. deceptiva with the new proposed species, they both have nearly identical macroscopic features, which is also a general cha- racter for all the species of the genus Gastrocybe ; they both have bisporic basidia and the same measurements of the spores too, though the germ pore is not so clear in G. iberica as in G. deceptiva seen under the optical microscope Source : MNHN. Paris GASTROCYBE IBERICA SP. NOV. 325 Fig. 4-10 — Gastrocybe iberica Moreno, Illana & Heykoop (Holotypus n? 9 990] ; 4-6 : hymeniform gelati- nized cuticle, 7-10 : pileocystidia. Fig. 4-10 — Gastrocybe iberica Moreno, Illana & Heykoop Holotype n* 9 990) ; 4-6 : cuticule hyméni- forme gélifiée. 7-10 : piléocystides. Source : MNHN. Paris 3. MORENO, C. ILLANA and M. HEYKOOP S > 12 < -- Fig. 11-16 — Gastrocybe iberica Moreno, Illana & Heykoop (Holotypus n° 9 990) ; 11-13 : bisporic basidia 14-16 : basidiospores. Fig. 11-16 — Gastrocybe iberica Moreno, Illana & Heykoop (Holotype n* 9 990) ; 11-13 : basides bispori. ques. 14-16 : basidiospores. Еч 14 Source : MNHN, Paris GASTROCYBE IBERICA SP. NOV 327 The described species of the genus Gastrocybe Watl. can be differentiated in the following key. Epicutis hymeniform ...... Gastrocybe .............. D Epicutis a cutis .. .. Galeropsis; SINGER (1963), HEIM (1950 1968) and SINGER & PONCE DE LEON (1982) 2. Carpophore soon deliquescent ; with lecythiform cheilocystidia ; basidia tetras- nane BR AR EA Gastrocybe lateritia 2'. Carpophore not deliquescent ; without lecythiform cheilocystidia ; basidia bisporic ..... "o е Ага 3. Lamellae intervenose ; without pileocystidia ........ Gastrocybe deceptiva 3'. Lamellae free, not intervenose ; abundant Darum pileocystidia, subglobose GAN NIS L TA TENE MISERTUS да m Gastrocybe iberica ACKNOWLEDGMENTS We are particularly greateful to Dr. R. Watling for his scientific advises. Also to Dr. D.H. Pfister, cura- tor of the Farlow Herbarium (FH) USA, for sending us the typus of Gastrocybe deceptiva Baroni. We also wish to thank Prof. S. Mariner-Bigorra for making the latin diagnosis. We also are greateful to Dr. F. Esteve Raventós for advising us with the English manuscript. REFERENCES BARONI T.J., 1981 — Collections in the Farlow Herbarium : New species of Melanophyllum and Gastrocybe, type studies on Armillaria and Stropharia. Mycologia 75 : 181-197. HAWKSWORTH D.L., SUTTON B.C. and AINSWORTH G.C., 1983 — Ainsworth & Bisby's Dictionary of the Fungi. Kew, Surrey, Commonwealth Mycological Institute HEIM R., 1950 — Le genre Galeropsis Velenovsky |- Cyttarophyllum Heim], trait d'union entre Agaricales et Gastérales. Rev. Mycol. (Paris) 15 : 3-28. HEIM R., 1968 — Deuxiéme mémoire sur les Cyttarophyllés. Bull. Soc. Mycol. France 84 : 103-116. MOSER R., 1983 — Die Róhrlinge und Blátterpilze (Polyporales, Boletales, Agaricales, Russula- les). Band II b/2. Basidiomyceten. Stuttgart, Gustav Fischer Verlag SINGER R., 1963 — Notes on Secotiaceous fungi : Galeropsis and Brauniella. Proc. Kon. Ned. Akad. Wetensch., C, 66 : 106-117. SINGER R. and PONCE DE LEÓN P., 1982 — Galeropsidaceae west of the rocky moun- tains. Mycotaxon 14 : 82-90. SINGER R., 1986 — The Agaricales in modern taxonomy. Koenigstein (RFA), Koeltz Scientific Books. WATLING R., 1968 — Observations on the Bolbitiaceae IV. A new genus of gastromycetoid fungi. Michigan Botanist 7 : 19-24. WATLING R. and GREGORY N.M., 1981 — Census catalogue of worlds members of the Bolbitiaceae. J. Cramer, Biblioth. Mycol. 82 : 1-224. WATLING R. and YOUNG T., 1983 — A new species of Panaeolopsis Singer. Notes Roy. Bot. Gard. Edinburg 41 (2) : 395-399. WATTLING R., QUADRACCIA L., TABARES M. and ROCABRUNA A., 1986 — Gastrocybe in Europe. Notes Roy. Bot. Gard. Edinburg 43 (2) : 307-311. Source : MNHN, Paris Source : MNHN. Paris 329 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES Von ARX J.A., GUARRO J. and FIGUERAS M.J., 1986 — The Ascomycetes genus Chaetomium. Beihefte zur Nova Hedwigia, Heft 84. Berlin, Stuttgart, J. Cramer, 612 p., 92 pl. ph. A la révision de la famille des Chaetomiacées, publiée par von ARX J.A., DREY- FUS M. & MULLER E. en 1984*, celle du genre Chaetomium constitue une suite logique. Dans ce travail, les auteurs ajoutent aux espéces généralement acceptées 5 espèces nouvelles : Ch. dreyfusii v. Arx, Ch. hispanicum Guarro et v. Arx, Ch. muelleri v. Arx, Ch. oblatum Dreyfus et v. Arx et Ch. repens Guarro et Figueras. En introduction ils présentent des considérations générales sur la morphologie, la physiologie et l'écologie des espèces du genre. La description des caractères culturaux, en conditions déterminées, est d'une grande importance dans la déter- mination des espèces. C'est pourquoi les auteurs ajoutent aux caractères morpho- logiques (paroi des ascomes, taille et forme et couleur des ascospores) des données d'ordre physiologique (vitesse de croissance, de production des ascomes et synthése de pigments libérés dans le milieu) et donnent à l'ensemble une valeur taxonomi- que. Ils accordent une importance particulière à la symétrie des ascospores, la présence, le nombre et la position des pores germinatifs dans la délimitation des espèces. Par contre, la structure et la ramification des poils stériles, bien que pris en compte dans la clef de détermination, ne sont pas des caractères auxquels von ARX & al. donnent une valeur taxonomique, en raison de leur dépendance des conditions de l'environnement. De belles photographies en microscopie électro- nique à balayage, des photomicrographies et quelques planches au trait donnent d'intéressantes informations complémentaires. Ce travail trés clair et bien argumenté sera trés utile pour les spécialistes du groupe, et pour les mycologues en général. L. Bettucci * Persoonia 12 : 169-179 FASSATIOVA O., 1986 — Moulds and filamentous fungi in technical microbiology. Progress in Industrial Microbiology, vol. 22. Amsterdam, Elsevier, 234 p. Ouvrage de détermination des principales moisissures rencontrées ou utilisées en industrie, le livre décrit 31 espèces de Mucorales et 120 espèces de Moniliales. Une clef de détermination des genres (selon les critères morphologiques classi- ques) précède chaque groupe et, dans chacun d'eux, les espèces les plus fréquen- tes sont décrites. Une clef de détermination spécifique est aussi proposée pour les Mucor, Penicillium, Aspergillus et Fusarium, genres les plus larges et fréquem- ment rencontrés dans l'industrie. Dans certains cas, la description des espèces est complétée par quelques notes concernant l'écologie. Des illustrations au trait ou photographiques, d'inégale qualité, complètent les descriptions. Chaque genre est suivi d'une liste de références bibliographiques (plutôt de nature systémati- Source : MNHN, Paris 330 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES que) qui permettent d'approfondir ou de compléter les recherches d'identifica- tion. Cet ouvrage est assez complet et sera certainement utile aux chercheurs travaillant en mycologie appliquée méme s'il n'apporte pas grand chose par rap- port à ses prédecesseurs, généralement plus spécialisés. M.F. Roquebert AYRES P.G. and BODDY L., 1986 — Water, Fungi and Plants (British Mycologi- cal Society Symposium 11, Lancaster April 85]. Cambridge, Cambridge Uni- versity Press, 413 p. L'eau joue un rôle critique dans le développement des champignons et des plan- tes, non seulement dans la constitution de la matière organique mais aussi dans le transport des éléments nutritifs à l'intérieur et à l'extérieur de la cellule et dans la conservation et la propagation des champignons. Pourtant les publications sur ce thème étaient jusqu'ici ponctuelles et disper- sées. L'ouvrage qui nous est proposé, compte rendu d'un symposium organisé par la British Mycological Society, constitue un bilan intéressant et original sur le sujet. On peut y reconnaitre trois parties principales, d'ailleurs complémentaires les unes des autres. La première regroupe des articles d'ordre général, portant sur les phénomènes physiques, les méthodes de mesure, de contrôle du potentiel hydrique des orga- nismes. Il précise les définitions et préconise l'homogénéisation des termes. C'est une bonne synthèse des données physiques et biologiques sur le rôle des gradients d'osmose et de turgescence dans la croissance végétative des champignons. L'inci- dence de l'humidité sur la formation, la dispersion et la germination des propagu- les est ensuite abordée. Un chapitre sur les relations entre la teneur en eau des sols et l'activité pathogène des micro-organismes qui y sont présents fait transi- tion entre cette première partie et la deuxième qui traite plus spécialement de l'influence des variations d'humidité en phytopathologie (chap. 9 a 16). La résistance aux maladies fongiques dépend en grande partie du degré d'humi- dité auquel la plante est soumise. L'effet du « stress hydrique » et son incidence sur la sensibilité aux pathogènes et sur la senescence est abordé en un chapitre auquel succèdent des analyses de questions ponctuelles telles que l'alternance secheresse-irrigation en culture tropicale, l'effet inhibiteur sur les champignons de composés excrétés par la plante en réaction au stress hydrique (ABA), le rap- prochement entre le rôle de ces composés et les phytoalexines sur le fonctionne- mEnt des stomates, l'incidence de la présence des champignons dans les échanges hydriques des plantes. La troisième partie [4 chapitres] a trait à la biodégradation des végétaux par les champignons et souligne, bien sûr, l'importance de la teneur en eau des substrats et des enceintes de stockage dans cette décomposition. Un dernier chapitre qui porte sur le rôle de l'eau dans le processus de décomposition des écosystèmes ter- restres complète cet ensemble d'exposés. Cet ouvrage est un bilan fort intéressant sur les connaissances du rôle de l'eau dans la biologie des champignons et des plantes ou dans les interactions entre ces organismes et l'environnement. Il devrait intéresser les chercheurs fondamenta- listes et les phytopathologistes comme ceux de l'industrie agroalimentaire et ouvrir de nouvelles voies d'investigation dans ce domaine. M.F. Roquebert Source : MNHN, Paris ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 331 ALLSOPP D. & SEAL K.J., 1986 — Introduction to biodeterioration. London, Edward Arnold, 136 p. L'objet de ce petit livre est de présenter, de manière synthétique, les différents aspects de la biodétérioration, définie comme étant l'attaque par des organismes vivants des matériaux mis en œuvre par l'homme. Les auteurs commencent par cadrer, un peu rapidement, les dimensions scientifiques et économiques du pro- blème, qui couvre un large domaine d'applications très diverses. Ils examinent ensuite successivement, et selon un ordre logique, les diverses classes de produits susceptibles d'être attaqués. Ils évoquent en premier lieu les matériaux naturels : cellulose, bois, denrées alimentaires, cuirs, textiles, pierres ; puis ils examinent la biodétérioration des matériaux manufacturés et transformés : carburants et lubri- fiants, matières plastiques, peintures, produits pharmaceutiques, métaux et adhé- sifs. Ils s'intéressent ensuite aux problèmes posés dans le bâtiment, les eaux, les moyens de transport, ainsi qu'au cas très particulier des collections de musées. Pour chaque cas, les organismes responsables des dégâts ou nuisances sont signa- lés, qu'il s'agisse de bactéries, de champignons, de végétaux supérieurs, d'insec- tes ou de rongeurs. Les moyens de détection, de protection et de lutte sont également évoqués à chaque étape, en faisant bien ressortir l'incicence des critè- res économiques dans le choix des décisions. Suit une intéressante description des méthodes pratiques d'enquête, de diagnostic et de sélection des traitements, ainsi que des techniques d'analyses et d'essais de simulation en laboratoire ou dans l'environnement. Enfin, les diverses méthodes de lutte physique, chimique et biologique sont résumées. Bien entendu, vu l'ampleur et la diversité du sujet, cet ouvrage ne se prétend pas exhaustif, et il est nettement insuffisant, à lui seul, sur le plan pratique pour traiter d'un problème de biodétérioration, qu'il s'agisse de l'identification des orga- nismes déprédateurs ou des traitements à appliquer. Comme son titre l'indique, il s'agit en réalité d'une introduction, fort bien faite, sur le sujet, à considérer plu- tôt comme un condensé destiné à sensibiliser un lecteur intéressé ou concerné, que comme un manuel technique. Fort heureusement, l'ouvrage est complété par une bibliographie générale et spécialisée assez brève, mais judicieuse et bien actua- lisée, qui permettra d'approfondir un sujet particulier en cas de nécessité. J. Oudot GINNS J.H., 1986 — Compendium of Plant Disease and Decay Fungi in Canada 1960-1980. Ottawa, Canadian Government Publishing Centre (Research Branch, Agriculture Canada, Publication 1813), i-x, 416 p La parution de ce Compendium à l'occasion du centenaire de la division Recher- ches [ministère de l'Agriculture), représente une étape importante dans l'histoire mycologique de ce pays, en particulier pour la phytopathologie. En effet, il vient savamment compléter et rectifier l'Annotated Index of Plant Diseases in Canada de 1. L. CONNORS, publié il y a vingt ans. |. H. GINNS, du Biosystematics Research Institute d'Ottawa, est un mycologue réputé, entre autres par ses nombreux tra- vaux sur la systématique des Basidiomycètes déprédateurs de bois. Ce manuel technique de 400 pages est « concu pour aider les phytopathologues, les reproducteurs de plantes, les écologistes, les services phytosanitaires et les taxo- nomistes dans l'identification des champignons se développant, au Canada, sur des plantes aussi bien cultivées que sauvages », mais son cadre d'utilité déborde largement cet objectif. Il présente une masse d'informations provenant de Source : MNHN. Paris 332 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 2 000 articles sélectionnés parmi ceux publiés entre 1960 et 1980 dans des mono- graphies et des revues scientifiques importantes de l'hémisphère nord-américain. En fait, c'est un résumé des observations faites sur des champignons observés sur. du matériel végétal, vivant ou mort, au cours de cette période. L'ouvrage se compose de quatre sections majeures. Après une introduction pré- cisant les divers objectifs visés, on trouve un index des hôtes, une bibliographie et les index des champignons. L'index des hôtes constitue le corps de l'ouvrage (264 p.). Il concerne prés de 600 genres rangés par ordre alphabétique, système de classement choisi pour la présentation des informations de toute nature. Cha- que genre comporte les espèces végétales relevées dans les documents consultés, avec quelques annotations intéressantes sur l'origine géographique, le nom com- mun français et anglais et l'aire de répartition dans les provinces et territoires cana- diens. Cette liste d'espèces est suivie par celle des champignons détectés sur ces plantes-hôtes, et l'on y trouve pour chacun également des informations concer- nant la distribution au Canada et le(s) numéro(s} de la référence bibliographique. Au total, prés de 4 000 champignons reconnus constituent ces listes partielles. Ils relèvent de tous les groupements systématiques classiques et représentent aussi bien des pathogènes notoires, répandus ou rares, que des espèces dont l'impor- tance économique, réelle ou anodine, n'a pas encore été confirmée, ou bien des éléments se développant en association avec les symptômes des maladies ou encore sur des tissus végétaux morts. Le chapitre bibliographie présente les 2 000 titres reproduits sur seulement 34 pages. Il est suivi par un index des espèces fongiques à double entrée, genre et espèce, avec dans les deux cas un renvoi à la bibliographie. En raison de la diversité des rôles écologiques sur lesquels se fonde la sélection des éléments fon- giques, le premier index comporte des genres à composants réputés phytopatho- gènes tels que Ascochyta, Ceratocystis, Cercospora, etc., qui présentent respectivement un nombre marqué d'espèces, et des entités génériques de cham- pignons depredateurs de bois : Corticium, Peniophora, Polyporus, Poria, etc. (ceux- ci révèlent aussi un nombre élevé d'espèces] et, enfin, des genres réunissant de simples saprophytes. Pour le nombre d'espèces par genre, Puccinia semble se pla- cer en tête avec un chiffre voisin de cent cinquante Il y a lieu de souligner que la sélection, la transcription, la synthèse, et la repro- duction du contenu informatif de cet ouvrage [prés de 30 000 entrées) n'ont pu ètre accomplies que grâce aux efforts conjugués et méritants de nombreux colla- borateurs techniques et scientifiques. S'il est évident que les informations publiées ont été sérieusement évalućes pour leur niveau de crédibilité et la position taxo- nomique des champignons cités, on note également un effort sensible de mise à jour de leur binôme et une adaptation des noms d'auteurs aux règles actuelles de la nomenclature. Un format adéquat, une présentation par page sur double colonne, des pages bien aérées permettant un balayage visuel rapide et une lec- ture aisée, constituent des solutions originales pour une présentation soignée de cette importante masse d'observations. Ce Compendium est « une étape vers la constitution d'une flore mycologique du Canada ». Il servira pour l'étude des interactions possibles entre les champi- gnons pathogènes, la mycoflore permanente et leur substrat écologique. À notre avis, c'est un modèle en son genre dans ce domaine, à suivre pour la réalisation de compendiums d'autres pays. Il sera sans doute activement consulté par des mycologues situés en dehors du territoire canadien. J. Mouchacca Source : MNHN, Paris ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 333 BOIDIN J. et LANQUETIN P., 1987 — Le genre Scytinostroma Donk. Berlin, Stut- tgart, J. Cramer, Gebrüder Borntraeger, Bibliotheca Mycologica, Band 114, 130 p. Bien qu'ils s'en défendent, les auteurs présentent ici une véritable monographie du genre Scytinostroma puisque la totalité des espèces décrites à ce jour est étu- diée. Les mycologues qui se sont essayés a l'étude des espèces de ce genre con- naissent les indiscutables difficultés auxquelles ils ont à faire face : c'est d'abord la consistance de la chair du basidiome, très coriace du fait de l'abondance de fibres intriquées masquant les hyphes génératrices ; c'est ensuite l'hyménium à la fois diffus et fragile ; ce sont enfin les spores très souvent absentes. Conscients que l'examen des nombreux spécimens d'herbier qu'ils ont effectué — pour indis- pensable qu'il soit — ne leur permettait pas de comprendre le genre de facon satis- faisante, les auteurs ont axé leur travail sur l'étude de récoltes fraîches, accompagnées de sporées. Cette démarche constitue la caractéristique majeure de l'ouvrage. Le livre débute par un exposé détaillé des méthodes d'étude les plus favorables à une observation précise. Sont ensuite traités la question de la délimitation — particulièrement ardue — entre les genres Vararia et Scytinostroma puis l'évolu- tion et les affinités du genre Scytinostroma. Suit une clé des espèces, précédant elle-même l'essentiel du travail qui est consacré à la description de celles-ci ; cette description est accompagnée des données culturales et cytologiques chaque fois que cela était possible. En ce qui concerne les caractères des mycéliums, les auteurs présentent leurs résultats inédits ou renvoient à leurs travaux antérieurs. Les espè- ces sont classées par ordre alphabétique et, pour la très grande majorité d'entre elles, accompagnées d'une planche de dessins qui illustre les gloeocystides et les spores et souligne la variété du type de fibres. Trente-deux espèces sont ainsi pré- sentées, parmi lesquelles treize sont nouvelles : six espèces peuvent être récol- tées en France, dont une nouvelle : S. mediterraneense. Enfin, dans une discussion, les auteurs montrent que les caractères morphologiques et culturaux permettent de reconnaître quatre groupes d'espèces dans le genre et présentent un tableau résumant les caractéristiques mycéliennes observées. Cette étude très complète et détaillée était attendue par tous les mvcologues s'intċ- ressant à l'étude de ces difficiles Aphyllophorales. Nul doute qu'ils trouvent dans ce travail des bases trés solides permettant la détermination — jusqu'ici particu- liċrement ardue — des espéces de ce genre. Une fois encore le lecteur notera l'importance accordée par les auteurs aux sporées et cultures qui permettent de faire appel au critére d'intercompatibilité chez les espéces hétérothalles bouclées ou non. Ainsi par exemple, est affirmée objectivement l'identité des spécimens indonésiens et africains de S. renisporum, езрёсе dépourvue de boucles. Citons également le cas de S. galactinum pour lequel les résultats des tests particulière- ment nombreux [résumés en deux tableaux) conduisent à reconnaitre l'existence de quatre espèces jumelles allopatriques de microscopie semblable. Un résumé de l'ensemble de l'ouvrage ainsi qu'une clé des espèces, rédigés en anglais, per- mettront aux lecteurs anglophones une utilisation aisée de ce livre. Signalons pour terminer que l'abondance d'espèces originaires d'Afrique et de Guadeloupe n'est due qu'aux circonstances ayant permis des missions mycologiques dans ces régions et que de nombreuses espèces restent probablement à découvrir. J.C. Léger Source : MNHN. Paris 334 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES VÉGH L., 1987 — Champignons des arbres et arbustes d'ornement. Paris, INRA, 121 p. Cet atlas, de petit format et présenté en reliure spirale, est constitué d'une brève introduction (2 p.), de la liste des champignons recensés suivant l'ordre alphabé- tique des hôtes (51 p.), de planches photographiques montrant les symptômes de quelques maladies répandues (58 p.) et enfin d'un index des essences citées sous leur nom latin ou francais (3 p.) On regrette la trop petite taille de certaines photographies ne fournissant pas une illustration correcte, et ne permettant pas une éventuelle détermination des maladies de nos arbres et arbustes d'ornement. Le quatriéme Congrés Mycologique International (IMC IV), organisé par l'Asso- ciation Mycologique Internationale (IMA) se tiendra à l'Université de Regensbourg, République Fédérale Allemande, du 28 aoút au 3 septembre 1990 (prof. J. Webs- ter, président IMA, Dpt of Biological Sciences, Univ. Exeter, Prince of Wales Road, Exeter EX4 4PS, Angleterre). The fourth International Mycological Congress (IMC IV) of the International Myco- logical Association (IMA] will be held at the University of Regensburg, Federal Repu- blic of Germany, from 28 August to 3 September 1990 (Prof. J. Webster, President IMA, Dpt of Biological Sciences, Univ. Exeter, Prince of Wales Road, Exeter EX4 4PS, U.K.) Source : MNHN. Paris 335 TABLE DU TOME 8 — 1987 ABDEL-HAFEZ A.1.1. and EL-SHAROUNY H.M.M. — Seasonal fluctuations of fungi in Egyptian soil receiving city sewage effluents 235 ABDEL-HAFEZ A.L.L, MOHARRAM A.M.M. and ABDEL-MALLEK A.Y. — Thermo- philic and thermotolerant fungi associated with seeds of five members of Umbelli- ferae from Egypt ... 5 315 ABDEL-MALLEK A.Y. — Voir ABDEL- HAFEZ ALI ADISA V.A. and OLA J.B. — Effects of two fungicides and three environmental fac- tors on the uredospore germination of Puccinia arachidis Speg. . . 23 ALI M.LA. — Voir ISMAIL I.M.K. ASCASO C. and RAPSCH S. — Influence of prefixation in the SE of the structure of symbionts of Lobaria spp. b 13 BEHBOUDI B.Ch. EBRAHIMZADEH H. et HADATCHI G. — Contróle de la forma- tion des rhizomorphes d'Armillariella mellea (Vahl. ex Fr.) Karst. par l'alternative nitrate-ammonium et certains acides aminés 227 BELLEMÈRE A. — Voir MELENDEZ-HOWELL L.M BETTUCCI L. — Variation saisonnière de l'activité colonisatrice de Basidiomycètes sur bois enterrés dans trois sols volcaniques Е 79 BUENDIA A.G. — Voir ORTEGA A CAILLEUX R. et JOLY P. — Étude de quelques stations italiennes de Pleurotus eryn- gii : progression mycélienne et structure des populations 101 DESCALS E. — Voir ROLDAN A. EBRAHIMZADEH H. — Voir BEHBOUBI B.Ch. EL-SHAROUNY H.M.M. — Voir ABDEL-HAFEZ A.LI HADATCHI G. — Voir BEHBOUDI B.Ch. HENNI J.E. — Evaluation de l'efficacité de certains champignons antagonistes vis- de Verticillium dahliae Klebahn KEYKOOP M. — Voir MORENO G. HONRUBIA M. — Voir ROLDAN A. ILLANA C. = Voir MORENO G. ISMAIL 1.M.K., SALAMA A.-A.M., ALI M.LA. and OUF S.A.-E. = Effect of some phenolic compounds on spore germination and germ-tube length of Aspergillus fumi- gatus and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici 51 JOLY P. — Voir CAILLEUX R KULIFAJ M. — Voir PARGUEY-LEDUC A. LAJOLO L. — Voir MODENESI P. LE PICARD D., TIRILLY Y. et TRIQUE B. — Antagonistes et hyperparasites du Fulvia fulva (Cooke) Ciferri. Interactions mycéliennes avec les champignons colonisant les taches de cladosporiose de la tomate z 43 MELENDEZ-HOWELL L.M., BELLEMÈRE A. et ROSSIGNOL J. TS NONE propos de l'ultrastructure d'ascospores « albinos » ou « granuleuses » de mutants d'Ascobolus immersus Pers. (gene bs} ...... is mA 269 Source : MNHN, Paris 336 MERCE J. — Hyphomycètes aquatiques Etude des variations saisonnières d'une popu- lation RATE? us Е MODENESI P. and LAJOLO L. — Histochemistry of cytoplasmic reserves in excipular hyphae of Catillaria bouteillei (Desm.) Zalhbr. à 38 MOHARRAM A.M.M. — Voir ABDEL-HAFEZ A.LI. MONTANT C. — Voir PARGUEY-LEDUC A. MORENO G., ILLANA C. and HEYKOOP M. — Gastrocybe iberica pus nov. in spun (Bolbitiaceae, Agaricales) 321 MOUCHACCA J. — Quelques Mikromycetes intéressants observes sur des feuilles vivantes ou mortes de Carpinus betulus L. 141 NAJIM L. — Contróle morphogénétique de la différenciation des sclérotes de Sclero- tinia fructigena : | — Études physiologiques 209 NAJIM L. — Contrôle morphogénétique de la différenciation des ааа аавд tinia fructigena : 11 — Études cytologiques et ultrastructurales A OLA J.B. — Voir ADISA V.A. ORTEGA A. y BUENDIA A.G*. — Contribución al estudio de la tribu Aleurieae Seaver emend. Korf en la Península Ibérica .. : 125 OUF S.A.-E. — Voir ISMAIL I.M.K. PARGUEY-LEDUC A., MONTANT C. et KULIFA] M. — Morphologie et structure de l'ascocarpe adulte du Tuber melanosporum Vitt. (Truffe noire du Périgord, Discomy- cétes] ... 173 RAPSCH S. — Voir ASCASO C REYNOLDS R. Don — A nonbitunicate ascus in the ascostromatic genus Asterina 251 ROLDAN A., DESCALS E. y HONRUBIA M. — Notas sobre hifomicetos acuáticos cas fitos en restos vegetales ROLDAN A., DESCALS E. y HONRUBIA M. — Notes on Tetracladium apiense Sinclair and Eicker 219 ROSSIGNOL J.-L. — Voir MELENDEZ-HOWELL L.M SALAMA A.-A.M. — Voir ISMAIL I.M.K. TIRILLY Y. — Voir LE PICARD D. TORRENTE-PANOS P. — Documentos para la caracterizacion de los ascos del género 61 Opegrapha Ach. ... 159 TRIQUE B. — Voir LE PICARD D. Analyses bibliographiques .. v 67, 167, 329 Instructions aux auteurs "es 77 Commission paritaire no 58611 Dépôt légal no 13628 - Imprimerie de Montligeon Sortie des presses le 20 décembre 1987 Imprimé en France Éditeur : A.D.A.C. (Association des Amis des Cryptogames) Président : A. Couté; Secrétaire : D. Lamy Trésorier : R. Baudoin; Directeur de la publication : H. Causse Source : MNHN. Paris CRYPTOGAMIE — MYCOLOGIE BUREAU DE RÉDACTION MM. DURRIEU G., pour les articles traitant d'Écologie et de Phytopathologie Laboratoire de Botanique, Faculté des Sciences, Allées Jules Guesde, 31000 Toulouse (France). JOLY P., pour les articles traitant de Systématique Laboratoire de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle 12, rue de Buffon, 75005 Paris (France). MANACHERE G., pour les articles traitant de Physiologie Laboratoire de Mycologie, Université de Lyon 1, 43, Bd du 11 Novembre 1918, 69622 Villeurbanne Cedex (France). Mmes ZICKLER D., pour les articles traitant de Cytologie Laboratoire de Génétique, Université de Paris Sud, Bát. 400, Centre d'Orsay, 91405 Orsay (France). ROQUEBERT M.F., s'occupera des autres spécialités. Laboratoire de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle 12, rue Buffon, 75005 Paris (France). COMITÉ DE LECTURE BOIDIN J., Lyon (France) MONTANT Ch., Toulouse (France) CHEVAUGEON J., Orsay (France) MOREAU Cl., Brest (France) GAMS W., Baarn (Hollande) PEGLER D.N., Kew (Grande-Bretagne) HENNEBERT G., Louvain-la-Neuve SUTTON B., Kew (Grande-Bretagne) (Belgique) TURIAN G., Genève (Suisse) LACOSTE L., Paris (France) Les manuscrits doivent être adressés (en 3 exemplaires) directement à un membre du Bureau de Rédaction, choisi pour sa spécialité. Chaque membre du Bureau se charge d'envoyer l'article 4 2 membres du Comité de Lecture (ou autres lecteurs compétants). Bien qu'étant avant tout une revue de langue française, les articles rédigés en Anglais, Allemand et Espagnol sont acceptés. Les recommandations aux auteurs sont publiées dans le ler fascicule de chaque tome. Source : MNHN Paris 4 JAN, 1986 ABONNEMENTS A CRYPTOGAMIE Tome 9, 1988 CRYPTOGAMIE comprend trois sections : ALGOLOGIE, BRYOLOGIE- LICHÉNOLOGIE, MYCOLOGIE, On peut souscrire indépendamment à chacune des sections. Abonnement à 1 section : France . (HT 305 F) 31720 F REN Е а ma ИЯ HT 335,00 F Abonnement aux 3 sections 3 France A TRA аз.» (НТ 870Е) 904,80 Е Е, HT 950,00 F Les anciens tomes et fascicules séparés de la REVUE DE MYCOLOGIE er de CRYPTOGAMIE - MYCOLOGIE sont toujours disponibles. MÉMOIRES HORS SÉRIE NO 2 (1942). Les matières colorantes des champignons, par 1. Pastac. 88 pages : 15 F. NO 3 (1943). Les constituants de la membrane chez les champi- gnons, par R. Ulrich. 44 pages : 15 F, N° 6 (1958). Essai biotaxonomique sur les Hydnés résupinés et les Corticiés, par J. Boidin. 390 pages, pl. et fig. : 120 F. N? 7 (1959). Les champignons et nous (Chroniques) (П), раг С. Becker. 94 pages : 25 Е, NO 8 (1966). Catalogue de la Mycothéque de la Chaire de Cryptoga- mie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (1) Micromy- cètes. Macromycètes (première partie). 68 pages : 25F, NO 9 (1967). Table des Matières (1936-1965). 85 pages : 20 F. — (1966-1975). 30 pages : 10 F. A FLORE MYCOLOGIQUE DE MADAGASCAR ET DÉPENDANCES publiée sous la direction de M. Roger HEIM Tome 1. Les Lactario-Russulés, par Roger Heim (1938) (épuisé). Tome 11. Les Rhodophylles, par Henri Romagnesi (1941). 164 pages, Ae EOF A Ке Tome Ill. Les Mycè Métrod (1949). 144 У оте a я (1949). Pages, Tome IV. Les Discomycétes de Madagascar Marcelle Le Gal (1953). 465 pages, 172 fg S150 F. ` = Tome V. Les Urédinées, par Gilbert et J.P. Bassino (1965). 180 pages, 97 fig., 4 pL hors-texte : 90 F. Réglements : — par virement postal au пот de A.D.A.C. - CRYPTOGAMIE 12, rue Buffon, 75005 Paris, C.C.P. SCE 34 764 055. — par cheque bancaire établi au méme,ordre.